1990 Fiscal Year Annual Research Report
自己抗原としてのDNA末端結合蛋白(Ku抗原)遺伝子のクロ-ニングとその利用
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01570369
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
三森 経世 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10157589)
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| Keywords | 遺伝子クロ-ニング / 抗Ku抗体 / DNA末端結合蛋白 / RFLP / 自己抗体 / 自己抗原 / 自己免疫疾患 |
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| Research Abstract |
【目的】強皮症(PSS)ー多発性筋炎(PM)重複症候群患者に特異的に見いだされる抗Ku抗体の対応抗原(70KD/80KDのDNA末端結合蛋白)をコ-ドするcDNAを利用し,自己免疫疾患患者と健常人におけるKu抗原遺伝子の構造を対比検討することを目的とした。
【方法】1)前年度までにクロ-ニングに成功した70KDーKu蛋白をコ-ドする部分CDNA(K68)と80KDーKu蛋白をコ-ドする全長CDNA(Ku80ー6)をプロ-ブに用いた。2)SLE20例,慢性関節リウマチ(RA)18例,PSSーPM重複症候群5例,健常人16例を対象とし,末梢血よりデキストラン法で分離した白血球からDNAを精製した。3)白血球DNAを種々の制限酵素で処理後,アガロ-ス電気泳動で分画し,ナイロンメンブレンに転写した。^<32>Pー標識K68またはKu80ー6CDNAをプロ-ブとしてハイブリダイズし,オ-トラジオグラフィで検出した。4)Ku抗原遺伝子のRFLPと自己免疫疾患との関連について検討した。
【結果】1)白血球DNAをHindIIIで処理し,Ku80ー6cDNAでハイブリダイズした時に,2.8Kb断片の多型性を認めた。他のcDNAや制限酵素では,かかるRFLPは認められなかった。2)2.8KbーHindIII多型断片を規定するcDNA領域は,Ku80ー6 cDNAの1412ー1663ヌクレオチド位に相当する252bp断片であった。このDNA領域は白血球ゲノムではポリメラ-ゼ連鎖反応で増幅できず,多型断片はイントロン内に存在することが示唆された。3)2.8KbーHindIII多型断片は,抗U1RNP抗体陽性SLE患者全員に見いだされ(11/11),抗U1RNP抗体陰性SLE(4/9)および健常人(7/16)に比して有意に高頻度であった。
【結語】80KDーKu自己抗原蛋白遺伝子の多型性を証明し,自己抗原多型遺伝子マ-カ-が特定の自己免疫疾患と関連する可能性が示唆された。
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[Publications] T.Mimori,et al: "Isolaton and characterization of cDNA encoding the 80ーKDa subunit protein of the human autoantigen Ku (p70/p80)recognized by autoantibodies" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 1777-1781 (1990)
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[Publications] 三森 経世: "自己抗体対応抗原としての非ヒストン蛋白" 日本臨床. 48. 813-820 (1990)
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[Publications] 三森 経世 他: "ウィルスの自己抗原抗体系における意義" 病理と臨床. 8. 1376-1379 (1990)
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[Publications] 三森 経世 他: "抗Ku抗体と抗Joー1抗体ー筋炎における自己抗体の意義" 臨床免疫. 22. 1812-1820 (1990)
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[Publications] 三森 経世 他: "遺伝子工学の臨床応用ー膠原病" 診断と治療. 78. 2367-2373 (1990)
