1989 Fiscal Year Annual Research Report
先天性免疫不全症由来B前駆細胞株に認められるIg重鎖領域DNA再構成異常の解析
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01570523
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
松岡 宏 名古屋大学, 医学部, 助手 (50157278)
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| Keywords | 先天性免疫不全症 / B前駆細胞株 / DNA再構成 / レコンビナ-ゼ / 重症複合型免疫不全症 / 伴性無ガンマグロブリン血症 / common variable immunodeficiency |
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| Research Abstract |
平成元年度には,以下の研究を行ない成果を得た。
(1)CIVD(common variable immunodeficiency:分類不能型先天性低ガンマグロブリン血症)患者からのB前駆細胞株の樹立:CVID患者8名について、EBウイルスを用いて細胞株樹立を試み、うち2名の末梢血、骨髄細胞よりB前駆細胞株を作成することに成功した。この研究において、EBウイルスによる細胞株化法にシクロスポリン、レクチンを使用するなど改良を加えた。また、クロ-ニング法についても改良し、限界希釈法の他、低温融解寒天を用いた方法を取り入れた。
(2)CVID患者由来B前駆細胞株のIgH遺伝子再構成の検討:細胞株よりDNAを抽出して、J_H由来DNA断片をプロ-ブに用いたサザン法により、これらの細胞株が再構成をおこしていることを確認した。2種類のD領域のDNA断片を用いたサザン法からこれらの領域は欠失していないことが示され、再構成がDJ再構成で留まっていることが推測された。
(3)IgH遺伝子の転写産物の同定:患者由来B細胞株より細胞質RNAを抽出し、Cμプロ-ブを用いてノザン法を行なった結果、XLAおよびCVID患者由来細胞株でCμ遺伝子産物の存在が示された。
(4)レコンビナ-ゼ活性測定のためのレコンビナントベクタ-の作成:12/23スペ-サ-と認識配列を含む、D領域断片とJ領域断片間にNeo遺伝子を挿入、さらにgpt遺伝子を連結したコンビナントベクタ-を作成した。現在、このベクタ-をエレクトロポ-レ-ションにより患者B前駆細胞株および各種EB細胞株に導入し、Neoおよびgpt遺伝子がこれらの細胞内で発現されるか否か検討中である。
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