1989 Fiscal Year Annual Research Report
糖尿病性血管障害に関する研究、血清中プロスタサイクリン産生刺激因子の基礎と臨床
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01570646
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
梅田 文夫 九州大学, 医学部, 講師 (80150431)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久富 昭孝 九州大学, 医学部, 助手 (10208762)
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| Keywords | 血清 / プロスタサイクリン産生刺激活性 / 精製 / 硫酸アンモニウム / イオン交換クロマトグラフィ- / ヘパリンクロマトグラフィ- / アンチトロンビンIII |
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| Research Abstract |
(1)血清(PDS)中のプロスタサイクリン産生刺激活性(PSA)因子の分離、精製の第一段階として、硫酸アンモニウムによる塩析について検討した。100%飽和硫安をPDSに添加し、生じた沈澱の溶解、透析試料のPSAを我々の確立した生物学的測定系にて測定した。主たるPSAは、硫安の20〜45%での沈澱部分に認められた。まず、イオン交換クロマトグラフィ-にて分析を試みた。イオン交換体としてはDEAEとCM celluloseを用いた。PDS中のPSAは、CM celluloseには親和性を示さず、DEAE celluloseに親和性を示すことが判明した。吸着されたPSAの活性は、100〜150mMのNaClの濃度勾配の部分に溶出された。従って、PSAは陰性荷電の蛋白であることが示唆された。次に、アフィニティクロマトグラフィ-に関して検討した。Con-A、WGA、heparin agaroseの3種類を用いた。Con-Aカラムを0.4Mのα-methyl-D-mannosideで溶出した。PDS中のPSA活性は、Con-Aには親和性を示さなかった。同様にWGAカラムを100mg/mlのN-acetyl-glucosamineで溶出した。PDS中のPSA活性は、WGAには親和性を示さなかった。一方、heparin agaroseカラムでの検討では、PDS中のPSAは、heparinに親和性を認め、2MのNaClで溶出可能であった。そこで、0.15ー2.0MのNaClの直線濃度勾配で溶出すると、NaCl濃度1.0、1.5Mの部分に二相性のPSAを認めた(peak A、B)。Peak Aの部分は、SDS-PAGE分析にて分子量60KDa、すなわち、精製アンチトロンビンIIIと同一の部位にSigle bandを認めた。また、アンチトロンビンIIIの特異抗体によりPSAに抑制が認められることよりpeak AはアンチトロンビンIIIと推定された。しかし、Peak BがPSAの未知の本態因子と考えられた。しかもPeak BのPSAは糖尿病患者にて著明に低下していた。今後精製を完了させる予定である。
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[Publications] Ono H.: "Glucose inhibits prostacyclin production by cultured aortic endothelial cells." Thrombos.Haemostas.60. 174-177 (1988)
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[Publications] Inoguchi T.: "Abnormality in prostacyclin-stimulatory activity in sera from diabetics." Metabolism. 8. 187-192 (1989)
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[Publications] Yamauchi T.: "Antithrombin III stimulates prostacyclin synthesis by cultured aortic endothelial cells." B.B.R.C.163. 1404-1411 (1989)
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[Publications] Umeda F.: "Reduced stimulatory activity on prostacyclin production by cultured endothelial cells in serum from aged and diabetic patients." Atherosclerosis. 75. 61-66 (1989)
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[Publications] Umeda F.: "Modification of prostacyclin-stimulatory activity in sera by glucose,insulin,low density lipoprotein,linoleic acid and linoleic acid hydroperoxide." Diabetes Res.Clin.Pract.8. 137-144 (1990)
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[Publications] Yamauchi T.: "Serum antithrombin III stimulates prostacyclin synthesis and its reduction in diabetes." Diabetes.
