1991 Fiscal Year Annual Research Report
糖尿病性血管障害に関する研究,血清中プロスタサイクリン産生刺激因子の基礎と臨床
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01570646
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
梅田 文夫 九州大学, 医学部, 講師 (80150431)
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| Keywords | PGI_2産生刺激因子 / 性状 / 精製 / 線維芽細胞培養液 / 血管内皮細胞 / 糖尿病性血管障害 |
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| Research Abstract |
血管内皮細胞より産生されるプロスタサイクリン(PGI_2)は、強力な血管拡張作用および血小板凝集抑制作用を有する。MacintyreらはPCI_2の産生を刺激する活性が流血中に存在することを報告しているが、その本態因子はいまだ不明である。我々は、培養ウシ血管内皮細胞による生物学的測定系を用い、流血中に本活性の存在を認め、しかも本活性の低下が糖尿病性血管障碍や動脈硬化症の発症、進展に関連している成績を報告してきた。一方、近年種々の生理活性物質が細胞の培養上清より精製されている。我々は、ヒト二倍体線維芽細胞の無血清培養上清(conditroned medium CM)中にPGI_2産生刺激活性を認め、本活性因子(PGI_2 production stimulating factor PSF)の精製を行った。約50L(総蛋白量2g)のCMを濃縮し、蛋白量1mg/mlに調整した。Wators社のHPLC装置に装着したDBAEー5PW(21.5×15)、HEPARINー5PW(7.5×7.5)、PROTEINーPAK300×2の各種HPLC用columnを用い、活性分画を粗精製した。SDSーPAGE上、非還元下でPSFは31kDaの単一バンド、還元下で35、27、8kDaのバンドとして認められた。31kDa蛋白をG4 reverseーphaseHPLCで分析すると、アセトニトリル濃度28%と31%の位置に2種類の蛋白が混在していることが判明した。アミノ酸シ-クエンサ-でそれぞれのN末端アミノ酸配列を分析した。Homology検索の結果、一方はinsulinーlike growth factor(IGF)binding protein4と相同性が高いことが判明した。そこで、IGFー1に対するligandーaffinity columnを作製した。PSF活性はIGFー1 ligand affinity columnのflowーthrough分画に認められた。この分画をC4 reverseーphaseHPLCで分析すると、アセトニトリル濃度31%の位置に単一ピ-クとして認められた。従って、PSFはこの新しい蛋白と推定されている。現在分子生物学的手法を用いてPSFの構造を決定中である。
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[Publications] Umeda F.: "Glucose reduces PDGF production and cell proliferation of cultured vascular endothelial cells" Horm.Metabol.Res.23. 274-277 (1991)
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[Publications] Ishii H.: "Increased intracelluar calcium mobilization in platelets from patients with type 2 (nonーinsulinーdependent) diabetes mellitus" Diabetologia. 34. 332-336 (1991)
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[Publications] Inoguchi T.: "Platelet stimulation for prostacyclin production in aortic endothelial cell cultures:alteration in diabetes mellitus" Horm.Metabol.Res.23. 539-544 (1991)
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[Publications] Ishii H.: "Increased inositol phosphate accumulation in platelets from patients with nonーinsulinーdependent diabetes mellitus" Diabetes Res.Clin.Pract.14. 21-28 (1991)
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[Publications] Umeda F.: "Partial purification of serum prostacyclin stimulatory activity by heparinーagarose column;abnormality detected in diabetics" Diabetes Res.Clin.Pract.(1992)
