1989 Fiscal Year Annual Research Report
生理活性アミンの特異的高感度蛍光定量試薬の開発とその応用
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01571172
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
三浦 俊明 北海道大学, 医療技術短期大学部, 助教授 (10091505)
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| Keywords | 生理活性アミン / 蛍光定量試薬 / オルトフタルアルデヒドアナロ-グ / ヒスタミン / グルタチオン / ポリアミン / オルニチン脱炭素酵素 / 特異試薬 |
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| Research Abstract |
本年度は、当初の計画通り、申請者がこれ迄に見いだしてきた多種類の生理活性アミンの特異的蛍光試薬を活用して、以下のような研究成果を得ることができた。
1.ポリアミンの選択的蛍光試薬である1,2-dibenzoy1-1,4-dihydrobenzene(DBDB)をプレラベル化試薬として用いるプトレッシンのHPLCを確立し、この方法を利用してアイソト-プを必要としないオルニチン脱炭素酵素活性の簡易で高感度な測定法を導くことに成功した。
2.申請者が開発した4-bromo-1,2-benzenedicarbaldehyde(BBDA)がヒスタミンに極めて特異的な蛍光試薬であることを確認するとともに、この試薬を用いて胃粘膜や肝臓などの組織中のヒスタミンの簡易定量法(用手法)を確立した。
3.ヒスタミンの高感度蛍光試薬である2-acetybenzaldehyde(ABA)をプレラベル化試薬として利用するHPLC法を開発し、この方法が血液や組織中のヒスタミンの高感度測定法として利用できることを示した。
4.同様に、上記のABAは、反応条件を適切に選択すれば、グルタチオンの特異的蛍光試薬としても利用てきるので、この試薬を用いてグルタチオンの簡易蛍光定量法を開発し、血液および組織血をグルタチオンの測定に応用できることを示した。
なお、上記方法のいくつかについては、フロ-イインジェクション分析法(FIA法)に適用することにより、測定の自動化、高速化とともに高感度化が達成できる見通しが既に得られている。
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[Publications] Teruki Yoshimura: "Difference between Histidine and Histamine in the Mechanistic Pathway of the Fluorescene Reaction with Orthophthalaldehyde." Analytical Biochemistry.
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[Publications] Teruki Yoshimura: "Fluorescence Reactions of Histamine with orthophthalaldehyde(OPA)Analogs.Two Types of Analogs with the Reactivity Different from OPA." Analytical Biochemistry,.
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[Publications] Teruki Yoshimura: "Determination of Serum Spermidine by High-performance Liquid Chromatography after Derivatization with Orthophthalaldehyde." Analytical Sciences,.
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[Publications] Toshiaki Miura: "High-performance Liquid Chromatographic Determination of Histamine by Postcolumn Fluorescence Derivatization with 2-Acetylbenzaldehyde." Analytical Sciences,.
