1990 Fiscal Year Annual Research Report
Peroxisome膜蛋白質の構造と機能並びに膜形成機構に関する研究
| Project/Area Number |
01571226
|
|---|
| Research Institution | Teikyo University |
|---|
Principal Investigator |
今中 常雄 帝京大学, 薬学部, 講師 (50119559)
|
|---|
| Keywords | ペルオキシソ-ム / 膜蛋白質 / モノクロ-ナル抗体 / オルガネラ生合成 / cDNAクロ-ニング |
|---|
| Research Abstract |
Peroxisome(Px)膜蛋白質の構造と能能並びにPx形成における役割を明らかにするため、Px膜蛋白質に対する各種抗体を調製するとともにcDNAのクロ-ニングを行ない、以下に示す新しい知見を得た。
1.ラット肝Px膜に対する各種モノクロ-ナル抗体を調製した。このうち、抗体(PXMla/207B)を用い、Px膜上に57kDa蛋白質を新たに見出した。さらに本蛋白質が、Px増殖に伴い顕著に誘導されることを明らかにした。
2.22kDa Px膜主要蛋白質については、精製標品をウサギに免疫し、抗体を調製するとともに、部分アミノ酸配列を決定した。現在、本抗体及び部分アミノ酸配列に対するoligonucleotideを用い、本膜蛋白質cDNAクロ-ニングを試みている。
3.Px形成に関しては、膜蛋白質の生合成過程を、ラット肝培養細胞を[^<35>S]Methionineでラベルし、Px膜蛋白質に対する抗体を用い免疫沈降で解析する系を確立した。現在パルスラベルを行ない、膜蛋白質のPxへの輸送過程を解析している。
4.ラット肝cDNAライブラリ-をPx膜に対する抗体でスクリ-ニングした結果、新たに、37kDaの未知の蛋白質及びleucine aminopeptidaseやF_1F_0ーATPaseのsubunit dと相同性が高い蛋白質をコ-ドするクロ-ンを新たに得、その塩基配列を決定した。さらにこれら蛋白質対する抗体を調製し、Pxでの存在状態について検討している。
これらの知見をもとに、次年度は培養細胞系を用い、Px膜の形成過程をより明らかにする。さらにcDNAの塩基配列解析等の解析をもとに、膜蛋白質の構造と機能の理解を深めるとともに、Px膜蛋白質の新たな機能を見出したい。
|
-
[Publications] Sato,R.: "Degradation of newly synthesized apolipoprotein Bー100 in preーGolgi compartment" J.Biol.Chem. 265. 11880-11884 (1990)
-
[Publications] Sato,R.: "Monoclonal antibody EMRla/212D recognizing site of doposition of extracelluIar lipid in atherosclerosis." J.Biol.Chem. 265. 21232-21236 (1990)
-
[Publications] Imanaka,T.: "A novel 57kDa peroxisomal membrane polypeptide detected by monoclonal antibody (PMMla/207B)." Biochim.Biophys.Acta. (1991)
-
[Publications] 今中 常雄: "細胞生物学実験法 III巻「細胞解析法ーII」 第3章 ペルオキシソ-ムとβ酸化活性" 廣川書店, (1991)
