1989 Fiscal Year Annual Research Report

マクロファ-ジのリポポリサッカリド受容体欠損変異株の分離と受容体の精製

Research Project

Project/Area Number	01571231
Research Institution	国立予防衛生研究所
Principal Investigator	西島正弘国立予防衛生研究所, 化学部, 室長 (60072956)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	天野富美夫国立予防衛生研究所, 化学部, 主任研究官 (90142132) 赤松穣国立予防衛生研究所, 化学部, 部長 (00072900)
Keywords	マクロファ-ジ / リポポリサッカリド / 受容体 / 変異株 / リピドA / シグナル伝達
Research Abstract	マクロファ-ジ系培養細胞株J774.1よりLPS結合損傷変異体(LRー9)を分離した。LRー9株は,親株と異なり,LPSに対して耐性であり,LPSにより活性化されることはなかった。しかし,LPSと異なる機構でマクロファ-ジを活性化するザイモザンやTPAで刺激すると,LRー9は親株とほぼ同様に活性化された。これらの結果から,LRー9ではLPSに特異的な細胞内シグナル伝達機構が欠損していることが示唆された。J774.1細胞表面のLPS結合活性を測定するため,LPSにpーOHーフェノ-ル基を導入後,その残基をクロラミンT法でヨ-ド化し,比活性の高い〔125^<>I〕LPSを調製した。これを用いて,4℃における〔^<125>I〕LPS結合能を調べた結果,J774.1細胞に特異的なLPS結合が観察され,およそ5時間で一定の結合量に達することがわかった。それに対し,LRー9では,LPSの特異的結合能が親株に比べて著しく低下していた。さらに,結合飽和曲線からScatーchard分析を行うと,親株には高親和性および低親和性の2種類の結合部位が存在し,一方LRー9株では高親和性の結合に損傷のあることが判った。これらの結果から,高親和性のLPS結合部位がJ774.1細胞におけるLPSの活性化に関与することが示唆された。また,LPSの結合はプロテア-ゼ処理によりほぼ完全に消失することから,LPSの結合にはタンパク質性の分子が関与することも明らかとなった。高親和性LPS結合の特異性を調べる目的で,非放射性のE.coliのR型,S型およびS.minnesotaのR型,S型のLPSを過剰に加え,(^<125>I〕LPS結合阻害を調べた結果,すべてのLPSでほぼ同程度阻害された。従って,LPSの結合には糖鎖の関与はないことが示唆された。さらに,リピドA,リピドIV_A,リピドXもLPSの結合を阻害することから,LPSの結合にリピドA部分が重要であることも判った。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Y.Tanaka,F.Amano,H.Kishi,M.Nishijima,Y.Akamatsu: "Degradation of arachidonyl phospholipids catalyzed by two phospholipase A_2 and phospholipase C in a lipopolysaccharideーtreated macrophage cell line,RAW264.1" Archives of Biochemistry and Biophysics. 272. 210-218 (1989)
[Publications] O.Kuge,Y.Akamatsu,M.Nishijima: "Abortive infection with Sindbis virus of a Chinese hamster ovary cell mutant defective in phosphatidylserine and phosphatidylethanolamine" Biochimica et Biophysica Acta. 986. 61-69 (1989)
[Publications] K.Hasegawa,O.Kuge,M.Nishijima,Y.Akamatsu: "Isolation and characterization of a Chinese hamster ovary cell mutant with altered regulation of phosphatidylserine biosynthesis" The Journal of Biological Chemistry. 264. 19887-19892 (1989)
[Publications] K.Hasegawa,Y.Anraku,M.Kasahara,Y.Akamatsu,M.Nishijima: "Isolation and characterization of Chinese hamster ovary cell mutants defective in glucose transport" Biochimica et Biophysica Acta.
[Publications] S.HaraーKuge,F.Amano,M.Nishijima: "Isolation of an LPSーresistant mutant,with defective LPS binding,of cultured macrophageーlike cells" The Journal of Biological Chemistry.
[Publications] 西島正弘(一部執筆): "毒性試験講座6ー毒性生化学<上>" 他人書院責任編集佐藤哲男,上野芳夫,遠藤仁, 338 (1989)

1989 Fiscal Year Annual Research Report

マクロファ-ジのリポポリサッカリド受容体欠損変異株の分離と受容体の精製

Principal Investigator

西島 正弘 国立予防衛生研究所, 化学部, 室長 (60072956)

Research Products

[Publications] Y.Tanaka,F.Amano,H.Kishi,M.Nishijima,Y.Akamatsu: "Degradation of arachidonyl phospholipids catalyzed by two phospholipase A_2 and phospholipase C in a lipopolysaccharideーtreated macrophage cell line,RAW264.1" Archives of Biochemistry and Biophysics. 272. 210-218 (1989)

[Publications] O.Kuge,Y.Akamatsu,M.Nishijima: "Abortive infection with Sindbis virus of a Chinese hamster ovary cell mutant defective in phosphatidylserine and phosphatidylethanolamine" Biochimica et Biophysica Acta. 986. 61-69 (1989)

[Publications] K.Hasegawa,O.Kuge,M.Nishijima,Y.Akamatsu: "Isolation and characterization of a Chinese hamster ovary cell mutant with altered regulation of phosphatidylserine biosynthesis" The Journal of Biological Chemistry. 264. 19887-19892 (1989)

[Publications] K.Hasegawa,Y.Anraku,M.Kasahara,Y.Akamatsu,M.Nishijima: "Isolation and characterization of Chinese hamster ovary cell mutants defective in glucose transport" Biochimica et Biophysica Acta.

[Publications] S.HaraーKuge,F.Amano,M.Nishijima: "Isolation of an LPSーresistant mutant,with defective LPS binding,of cultured macrophageーlike cells" The Journal of Biological Chemistry.

[Publications] 西島正弘(一部執筆): "毒性試験講座6ー毒性生化学<上>" 他人書院 責任編集 佐藤哲男,上野芳夫,遠藤仁, 338 (1989)

西島正弘国立予防衛生研究所, 化学部, 室長 (60072956)

[Publications] 西島正弘(一部執筆): "毒性試験講座6ー毒性生化学<上>" 他人書院責任編集佐藤哲男,上野芳夫,遠藤仁, 338 (1989)