1990 Fiscal Year Annual Research Report
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01580157
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
牧 正敏 京都大学, ウイルス研究所, 助教授 (40183610)
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| Keywords | カルパタスチン / カルパイン / プロテア-ゼ / プロテア-ゼインヒビタ- |
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| Research Abstract |
1.カルパスタチンの細胞増殖,分化に及ぼす影響を調べるため、カルパスタチンcDNAを正あるいは負方向に動物細胞発現ベクタ-につなぎ、ラット線維芽細胞および神経芽腫細胞に導入した。外来カルパスタチン遺伝子を発現する幾つかの細胞株を樹立したが、細胞の増殖性や薬剤による神経突樹誘導能には差が認められなかった。用いた細胞株は、内在性のカルパスタチンのレベルが既に十分に高く、外来遺伝子発現による増加量が2〜3倍にしかならないこと,またアンチセンスRNA発現ベクタ-の場合も抑制量が十分でないことの理由により、導入遺伝子の効果が観察されなかった可能性がある。
2.Rat1細胞は、ヒト成人T細胞白血病ウイルスHTLVーIのtax遺伝子産物によって悪性形質転換させることができる。形質転換細胞と対照細胞でウエスタンブロッティング法でカルパイン、カルパスタチンレベルを比較したが顕著な差は認められなかった。
3.ヒトゲノムDNAの解析を前年度から引続き行った。カルパスタチンは一次構造上、4つの繰返しドメインと1つの非相同性領域ドメインLをN末側にもつ。今回、ドメインLは6つのエキソンに分れ、さらにS'非翻訳領域にも1つのイントロンの存在が判明した。
4.赤血球,K562細胞のカルパスタチンは他細胞と較べ分子が小さい。スプライシングに帰因する翻訳領域の差異の可能性を探るため、mRNAをcDNAに変換後PCR解析を行った。網状赤血球,K562細胞,T細胞,B細胞いずれの場合も、予想される大きさが得られ、mRNAの異型性は存在せず、細胞の種類によるカルパスタチン分子の大きさの違いは、翻訳後のタンパク質分解に帰因すると推定される。このことは、有核赤血球であるニワトリ赤血球では他組織と同一大きさであったことからも支持される。
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[Publications] Yoshifumi Adachi: "Calpain inhibitors block TPAーdependent down regulation of protein Kinase C" Biomedical Research. 11. 313-317 (1990)
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[Publications] Woon Joo Lee: "Factors influencing the binding of calpain I to human erythrocyte insideーout vesicles." Biochemistry International. 22. 163-171 (1990)
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[Publications] Masatoshi Maki: "Calpastatins:Biochemical and Molecular Biological Studies" Biomed Biochim Acta.
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[Publications] Emiko Takano: "Molecular Diversity of Erythrocyte Calpastatin" Biomed Biochim Acta.
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[Publications] Atsushi Tanaka: "Oncogenic transformation by the tax gene of human Tーcell leukemia virus type I in vitro." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.87. 1071-1075 (1990)
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[Publications] 牧 正敏: "カルパスタチンの構造と作用機構" 化学と生物. 28. 369-377 (1990)
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[Publications] Masatoshi Maki: "Structureーfunction relationships of calpastatins(分担章名).(Intracellular calciumーdependent proteolysis 書名)37P〜54P分担(全288ペ-ジ)" CRC Press Inc.Boca Raton,FL USA, 18 (1990)
