血液凝固VII因子及びIX因子に発見された新しいSer結合型糖鎖の構造と機能解析

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01580166
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 太和田 勝久 九州大学, 理学部, 助教授 (20029507) ; 長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
• Keywords: 血液凝固VII因子 / 血液凝固IX因子 / 外因系凝固反応 / プロテインZ / 糖ペプチド / キシロ-ズ / グルコ-ス / 上皮細胞増殖成長因子(EGF)

Research Abstract

VIIとIX因子は、外因系凝固開始反応に関与するビタミンK依存性タンパク質である。申請者らは、昨年度、外因系凝固の開始反応機構を知る一歩として、ウシVII因子精製法に改良を加えるとともに、その全一次構造を決定した(Takeya,H.et al.(1988)J.Biol.Chem.263.14868-14877)。その際、VII因子より得られたSer-52を含むペンタペプチドの一次構造解析において、この残基がPTH-Serとして検出されないことに気付いた。同じことがウシIX因子のSer-53及びプロテインZのSer-53を含むペンタペプチドにおいても見い出された。そして、ウシVII、IX因子のSer-52、Ser-53がそれぞれプロセスされており、その修飾基はGlclモルとXy12モルから成る糖鎖であることを報告した。今回、ウシのEGF様第1ドメインのそれと同じ位置にSerを持つヒトIX、VII、Z、ウシZについて、同様な修飾があるかどうかを調べた。これらのタンパク質をS-アミノエチル化後、リシルエンドペプチタ-ゼ消化し、逆相HPLCにより相当する糖ペプチドを単離した。糖組成分析、質量分析の結果、ヒトIX因子、ウシプロテインZの修飾基は、Xyl/Glc(モル比)=1:1及び2:1から成る糖鎖を含んでいた。一方、ヒトVII因子とプロテインZの修飾基はXyl/Glc(モル比)=1:1と2:1から成る2種の糖鎖がそれぞれ存在し、不均一であった。更にヒトIX因子の糖鎖ペプチドをヒドラジン分解し、2-アミノピリジン(PA)で蛍光標識後、加水分解した結果、Ser-53と結合しているのはGlcであることが明らかとなった。また、ウシIX因子のPA-Glc-(Xyl_2)を部分水解したところ、PA-Glc-Xylを生成し、その糖鎖のHPLCでの溶出位置はヒトIX因子から遊離したPA-Glc-Xylのそれに一致した。以上の結果から、ヒトIX因子のEGF様第1ドメインに結合した糖鎖はXyl-Glc-Ser-53と推定した。

Research Products

• [Publications] Nishimura,H.: "Identification of a Disaccharide(Xyl-Glc)and a Trisaccharide(Xyl_2-Glc)O-Glycosidically Linked to a Serine Residue in the First Epidermal Growth Factor-like Domain of Human Factors VII and IX and Protein Z and Bovine Protein Z." J.Biol.Chem.264. 20320-20325 (1989)
• [Publications] Miyata,T.: "Fibrinogen Nagoya:a Replacement of Glutamine-329 by Arginine in the γ-Chain That Impairs the Polymerization of Fibrin Monomer." J.Biochem.105. 730-735 (1989)
• [Publications] Sakai,T.: "Blood Clotting Factor IX Kashihara:Amino Acid Substitution of Valine^<182> by Phenylalanine." J.Biochem.105. 756-759 (1989)
• [Publications] Miyata,T.: "Factor XII Washington D.C.:Inactive Factor XIIa Resulting from Replacement of Cysteine-571 by Serine." Proc.Natl.Acad.Sci.,U.S.A.86. 8319-8322 (1989)
• [Publications] Suehiro,K.: "Blood Clotting Factor IX B_M Nagoya:Substitution of Arginine-180 by Tryptophan and Its activation by Chymotrypsin." J.Biol.Chem.264. 21257-21265 (1989)
• [Publications] Sugimoto,M.: "Factor IX Kawachinagano:impaired function of the Gladomain caused by attached propeptide region due to substitution of arginine by glutamine at position." Br.J.Haematol.72. 216-221 (1989)
• [Publications] 宮田敏行,岩永貞昭: "組織因子(BIOmedica 4巻,1213-1218頁" 北隆館, 6 (1989)
• [Publications] 徳永文稔,岩永貞昭: "抗リポ多糖因子:その構造と生物活性(代謝,26巻,29-39頁)" 中山書店, 11 (1989)