Transposonを利用した神経伝達に関与する遺伝子の単離と機能解明

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01638509
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 細野 隆次 金沢大学, 医学部, 講師 (40019617)
• Keywords: アセチルコリン / Tcl / C.elegans / センチュウ / トランスポゾンタッギング / unc-18 / トリクロロフォン抵抗性 / シナプス終末

Research Abstract

シナプスでの化学伝達物質伝幡の制御機構を明らかにするためC.elegansコリン作動性ニュ-ロンを対象としてアセチルコリンの動態を制御する遺伝子検索、クロ-ニングを行い次のことが明らかになった。
1.変異するとアセチルコリンが異常蓄積する7遺伝子を見出した。
2.それらの遺伝子にトランスポゾンTclを挿入した。
3.Tc1を用いて、7遺伝子の1つunc-18をクロ-ニングした。
4.このクロ-ンを用い、多数のcDNAクロ-ンを得た。
5.Northernによってunc-18がコ-ドするmRNAが3.6kbであると決定した。
6.ゲノム及びcDNAクロ-ンの塩基配列を決定し、homology検索を行ったところ、過去に知られていない新しい遺伝子であることが明らかになった。
更にunc-18遺伝子の性状を明らかにするため、この遺伝子の上流の調節領域について調べている。cDNAを発現系Vectorへ組み込み、大量の遺伝子産物の作成、それを用いた抗体作成を行っている。発生に伴う遺伝子発現をmRNAの消長及びin situ hybridizationによる細胞内局在を調べている。

Research Products

• [Publications] R.Hosono: "Alterations of life span in the nematode Caenorthabditis elegans under monoxenic culture conditions" Experimental Gerontology. 24. 251-264 (1989)
• [Publications] R.Hosono: "Spotaneous mutations of trichlorfon resistance in the mematode Caenorhabditis elegans" Zoological Science. 6. 697-708 (1989)
• [Publications] R.Hosono: "Genes affecting acetylcholine levels and clonig of unc-18" the 7th International C.elegans meeting(Abstract). 126 (1989)
• [Publications] 細野隆次: "C.elegans神経系" 蛋白質・核酸・酵素. 34. 315-324 (1989)
• [Publications] 細野隆次: "変異によりアセチルコリン(ACh)の異常蓄積をもたらす遺伝子とその転写産物の解析" 生化学. 61. 825 (1989)
• [Publications] 細野隆次: "C.elegans unc-18遺伝子及びcDNA構造解析" 第12回日本分子生物学年会講演要旨集. 177 (1989)