1989 Fiscal Year Annual Research Report

小脳ミュ-タントマウスを用いたシナプスにおけるインパルス伝達機構の解析

Research Project

Project/Area Number	01659509
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	御子柴克彦大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (30051840)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	前田信明日本学術振興会, 特別研究員 (90202308) 池中一裕大阪大学, たんぱく質研究所, 助手 (00144527) 新延道夫大阪大学, たんぱく質研究所, 助手 (80135748)
Keywords	IP_3(イノシト-ル3リン酸)受容体 / ライアノジンレセプタ-
Research Abstract	Ca^<2+>を中心とする情報伝達系が高次神経機能の発現に重要な役割を果たすことが最近明らかにされつつある。しかしながらその分子機構については全くわかっていない。今回、我々は小胞体からのCa^<2+>遊離に直接関与するIP_3受容体についてマウス小脳より精製を行ない以下の知見を得たので報告する。 1.ddYマウス小脳のP_2/P_3画分を1%trtonX-100で可溶化した上清について、DE-52,Heparin agarose,Lentillection Sepharoee,Hydroxylapatiteの各カラムクロマトグラフィ-を行なうことによりIP_3受容体をSDS電気泳動で単一蛋白質として精製することに成功した。精製した受容体のIP_3に対するKD値は83nM、Bmaxは2.1pmol/μgproteinであった。 2.精製したIP_3受容体を架橋剤で架橋し、電気泳動で分析したところ二、三、四量体の形成が認められた。架橋剤の濃度を上げても四量体以上の重合体の産生はみられなかったのでnativeな受容体は四量体として存在するものと考えられる。 3.精製したIP_3受容体の存在状態をネガティブ染色後電子顕微鏡を用いて調べたところ、一辺25nmの四葉クロ-バ-状の構造を示すことが認められた。この構造は骨格筋の筋小胞体からのCa^<2+>動員に関わるライアノジンレセプタ-と酷似しており、共通の機能を持つ蛋白質として一次構造上の類似が示唆される。以上の結果は、中枢神経系におけるCa^<2+>動員に関与する物質を分子レベルで始めてとらえることが出きたもので、高次神経機能に果たすCa^<2+>の役割をより基本的なレベルで明らかにする可能性があるものとして期待出きる。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Nobuaki Maeda: "Autoradiographic visualization of a calcium channel antagonist,I-conotoxin GVIA,binding site in the brains of normal and cerebellar mutant mice(pcd and weaver)." Brain Research. 489. 21-30 (1989)
[Publications] Nobuaki Maeda: "Developmental expression an intracellular location of P400 protein characeristic of Purkinje cells in the mouse cerebellum" Developmental Biology. 133. 67-76 (1989)
[Publications] Hideyuki Yamamoto: "Phosphorylation of P400 protein by cyclic AMP-dependent protein kinase and Ca/calmodulin-dependent protein kinase II." Journal of Neurochemistry. 53. 917-923 (1989)
[Publications] Teiichi Furuichi: "Nucleotide sequence of cDNA encoding P400 protein in the mouse cerebellum." Nucleic Acid Research. 17. 5385-5386 (1989)
[Publications] Teiichi Furuichi: "Primary structure and functional expression of the inositol 1,4,5-trisphosphate-binding protein P400." Nature. 342. 32-38 (1989)
[Publications] Nobuaki Maeda: "A cerebellar Purkinje cell marker P400 protein is an inositol 1,4,5-trisphosphate(InsP3)receptor protein--Purification and characterization of InsP3 receptor complex." the EMBO Journal. 9. 61-67 (1990)
[Publications] Katsuhiko Mikoshiba: "Myelination and Demyelination:Implications for Multiple Sclerosis." Plenum Publ.Corporation, 12 (1989)
[Publications] Katsuhiko Mikoshiba: "Myelin" The Telford Press,New Jersey, inpress

1989 Fiscal Year Annual Research Report

小脳ミュ-タントマウスを用いたシナプスにおけるインパルス伝達機構の解析

Principal Investigator

御子柴 克彦 大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (30051840)

Research Products

[Publications] Nobuaki Maeda: "Autoradiographic visualization of a calcium channel antagonist,I-conotoxin GVIA,binding site in the brains of normal and cerebellar mutant mice(pcd and weaver)." Brain Research. 489. 21-30 (1989)

[Publications] Nobuaki Maeda: "Developmental expression an intracellular location of P400 protein characeristic of Purkinje cells in the mouse cerebellum" Developmental Biology. 133. 67-76 (1989)

[Publications] Hideyuki Yamamoto: "Phosphorylation of P400 protein by cyclic AMP-dependent protein kinase and Ca/calmodulin-dependent protein kinase II." Journal of Neurochemistry. 53. 917-923 (1989)

[Publications] Teiichi Furuichi: "Nucleotide sequence of cDNA encoding P400 protein in the mouse cerebellum." Nucleic Acid Research. 17. 5385-5386 (1989)

[Publications] Teiichi Furuichi: "Primary structure and functional expression of the inositol 1,4,5-trisphosphate-binding protein P400." Nature. 342. 32-38 (1989)

[Publications] Nobuaki Maeda: "A cerebellar Purkinje cell marker P400 protein is an inositol 1,4,5-trisphosphate(InsP3)receptor protein--Purification and characterization of InsP3 receptor complex." the EMBO Journal. 9. 61-67 (1990)

[Publications] Katsuhiko Mikoshiba: "Myelination and Demyelination:Implications for Multiple Sclerosis." Plenum Publ.Corporation, 12 (1989)

[Publications] Katsuhiko Mikoshiba: "Myelin" The Telford Press,New Jersey, inpress

御子柴克彦大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (30051840)