1989 Fiscal Year Annual Research Report
インスリン遺伝子を導入した培養皮膚による糖尿病治療法
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01870034
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan University |
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Principal Investigator |
吉里 勝利 東京都立大学, 理学部, 助教授 (20095516)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐々木 澄志 (財)食品薬品安全センター, 研究技術員
向井 鐐三郎 国立予防衛生研究所, 霊長類センター, 主任研究官 (90133040)
山崎 義光 大阪大学, 医学部, 助手 (40201834)
河盛 隆造 大阪大学, 医学部, 講師 (00116021)
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| Keywords | 人工皮膚 / インシュリン / 遺伝子組換え / コラ-ゲン / ゼラチン / 血糖値 |
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| Research Abstract |
インシュリン遺伝子を人工皮膚に導入する技術開発のため次の研究を行った。(1)インシュリン発現組変え体の作成。ヒトインシュリン遺伝子はG.I.Bellより入手したゲノムDNA組換え体PgHI6ー2よりHincIIとBgIIで切り出した1605塩基を用い、ラット遺伝子は東北大学岡本教授より供与されたcDNAを用いた。ベクタ-にはレトロウイルスLTRのプロモ-タ(pHiSx70)を用い、BamtlIサイトにリンカ-を着けて上記遺伝子を導入した。またSV40系のベクタ-としては、選択マ-カ-としてHiSDを持ったPSVーHisを用いた。得られた組換え体は、レトロウイルスとしての感染やリン酸カルシウム沈澱法によりNIH3T3細胞に導入した2.5nMヒスチジノ-ルを含むMEM培地で選択した。安定なトランスフォ-マントをいくつか得た。in vitroでのインシュリン分泌を検討中である。
(2)細胞組み込み型人工皮膚基質の開発。従来人工皮膚作製の基材としてはコラ-ゲン線維が使用されてきたが、in vitroでの細胞の反応性をみる限り、ゼラチンの方が細胞の親和性に関して優れている。そこでゼラチンを人工皮膚の基材とするための技術を開発した。ウシから得られたゼラチンを凍結乾燥し多孔性ゼラチンスポンジを作製し、これを水溶性架橋剤で処理し安定化した。さらにスポンジの一方の面にゼラチン薄膜を付着させこれを人工基底膜とする技術を開発した。スポンジを基材として培養セルを作りヒトの表皮細胞および線維芽細胞を培養し細胞の反応性を調べたところ良好な親和性が観察された。(3)グルコ-スセンサ-に関する研究。ニ-ドル型のミクロセンサ-で血糖値を直接測定することを試みた。
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[Publications] Yoshizato,K: "Cultred artificial skinーPresent and Future" Jpn.J.Artif.Organs. (1990)
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[Publications] Nishikawa,K and Yoshizato,K.: "An epidermal factor whic stimulates the synthesis of collagenase by fibroblasos in a reconst:tuted skin" Biomedical Res.
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[Publications] Yamasaki,Y,Kawamori R.,et al: "Simultanous evaluation of insulin secretion and action using a model" Diabetes Res.and Clin.Pract.6. 17-25 (1989)
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[Publications] Yamasaki,Y.,Ueda,N., et al.: "Direct measuxemetnt of whole blood glucose by a neadli-type sensor" Clinica Chimica Acta. 93. 93-98 (1989)
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[Publications] Shichire,M.,Yamasaki Y.,et al.: "Membrane desing for extending the long-life of implantable glucose sensor" Diabetes Nurt.&Metab.14. 89-94 (1989)
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[Publications] Kono,K.,Yoshizato,K.,et al: "Cell cycle analysis of human dermal fibroblases cultured on or in hydrated type l collagen lattiles" Arch.Dermatol.Res.282. 1-5 (1990)
