ヒト肝微量試料における遺伝子発現動態解析システムの開発

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01870036
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 房本 英之 大阪大学, 医学部, 講師 (90124776)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 片山 和宏 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 佐々木 裕 大阪大学, 医学部, 助手 ; 笠原 彰紀 大阪大学, 医学部, 助手 (70214286) ; 林 紀夫 大阪大学, 医学部, 講師 (00144478)
• Keywords: 遺伝子発現 / プロトオンコジ-ン / DNA / PKC

Research Abstract

肝組織での遺伝子発現の遍在性を検討するために,in situ hybridyzation法を開発し、四塩化炭素障害肝の再生過程におけるプロトオンコジ-ンやprotein kinase C(PKC)の発現を組織レベルで検討した。正常肝ではcーmyc、cーHaーras遺伝子発現細胞は少数観察されるのみであった。マウスに四塩化炭素投与による肝障害を作成し、その再生過程における発現動態を検討すると、cーmyc遺伝子発現は四塩化炭素投与6時間から小葉中心域で増強し、投与後12時間に明らかな小葉偏在性をもって発現細胞数は最大となり、以後減少した。一方、cーHaーras遺伝子発現は投与後12時間から小葉中心域で増強し、投与後24ー36時間で同様に小葉遍在性を伴い発現細胞数は最大となった。これら発現細胞は小葉中心域に観察される壊死巣、脂肪変性の周辺に多く観察された。また、cーmycやcーHaーrasの発現は肝実質細胞のみならず非実質細胞にも観察された。このように、in situ hybridyzationを用いることでプロトオンコジ-ンの小葉内遍在性をもった発現動態が明らかになったが、さらに、肝再生過程に於てPKCの発現亢進をもたらす因子を同定する目的で、培養肝細胞を用いて種々の因子のPKC発現におよぼす影響を検討した。四塩化炭素投与後12時間のラット血清で分離肝細胞を12時間培養すると、正常ラット血清や牛胎児血清で同様に処理した肝細胞に比べて、PKCαの発現が極めて強く観察された。以上より、肝再生におけるPKCの発現、DNA合成との時間的部位的関連を考慮に入れると、肝再生因子の情報がそのレセプタ-を介してPKCを活性化し、その情報が核に伝えられてプロトオンコジ-ンの発現を引き起こし、その結果DNA合成が亢進すると考えられた。

Research Products

• [Publications] Sasaki Y,et al.: "Cellular analysis of cーHaーras gone expression in rat liver after CCl_4 administration." Hepatdogy. 10. 494-500 (1989)
• [Publications] Sasaki Y,et al.: "Heteroge activation of protein kinase C during rat liver regeneration induced by carbon tetrachloride administration" FEBS LETTERS. 254. 59-65 (1989)
• [Publications] Ito T,et al.: "Sequential proto oncogene expression during regeneration in rats stomach" Gastroenterology. 98. 1525-1531 (1990)
• [Publications] 三田 英治,他: "慢性肝疾患におけるcーmycおよびcーHaーras発現に関する検討" 肝臓. 31. 118-122 (1990)
• [Publications] 春名 能通,他.: "ラット肝化学発癌過程におけるγーGTP転写発現動態の解析" 肝臓. 30. 649-655 (1989)
• [Publications] 伊藤 敏文,他: "急性胃病変の粘膜再生・修復過程におけるprotoーoncogeneの発現動態." Therapentic Research. 11. 26-31 (1990)