血小板凝集阻止作用を有する生体常在のペプチドの医薬品としての開発研究

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01870099
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 大森 晋爾 岡山大学, 薬学部, 教授 (10032872)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 坂上 享宏 千寿製薬(株), 研究所, 所員 ; 緒方 一美 千寿製薬(株), 研究所, 部長 ; 坪井 誠二 岡山大学, 薬学部, 助手 (50172052) ; 池田 己喜子 岡山大学, 薬学部, 講師 (20112154)
• Keywords: グルタチオン / リンゴ酸 / 血小板凝集 / DNA合成 / 肝細胞 / グルタチオンーSー転移酵素 / カルシウムイオン / EGF

Research Abstract

1.Sー(1,2ーdicarboxyethyl)glutathione(以下DCEーGS)の生合成酵素精製:ラット肝よりグルタチオンとLーリンゴ酸を基質にしてDCEーGSを合成する新しいグルタチオンSー転移酵素を精製した。分子量は53KDでモノマ-であった。(J.Biochem.)2.DCEーGSによる血小板凝集阻止作用について:DCEーGSは1分子に4つのカルボキシル基を有し、一見してCa^<++>錯体を形成すると思えた。そこで採血の時これを加えた。予想通り強く凝固を阻止した。次にDCEーGSのCa^<++>結合力を調べた。予想に反して結合力はなかった。そこでこの抗凝固作用は血小板に対するものと考え追究した。その結果ADPやスロンビンによる凝集反応をDCEーGSが阻止した。またコラ-ゲンによって起る第2次凝集を阻止しアラキドン酸による凝集を最も強く阻止した。しかしフォルボ-ルエステルによる凝集は阻止しなかった。(Arch.Biochem.Biophys.)引き続きこれらの凝固阻止反応機構を分子レベルで解明した。その結果(1)DCEーGSは1、3mMでATP及びセロトニンの放出を各々78、73%抑制した。(2)血小板膜よりアラキドン酸の遊離及びトロンボキサンA_2の生成を1、5mMで各々61、79%抑制した。(3)2、0mMで血小板内cAMP濃度及びアデニレ-トシクラ-ゼ活性を各々202、211%上昇させた。(4)DCDーGS0.5及び1、0mMでシクロオキシゲナ-ゼ活性を各々34、48%抑制した。(Biochem、Biophys、Acta)3.ラット肝一次培養細胞におけるEGFによるDNA合成をDCEーGSが促進する:ラットの肝細胞を一次培養する時EGFを加えるとチミジンの取り込みは6、78倍となった。この上にDCEーGSを加えると10、17倍となった。しかし、DCEーGS単独ではその作用がなかった。また、DCEーGSに似た化合物にはその作用がなかった。(Res、Exp、Med、)4.ラットをアセトアミノフエンで急性肝障害を起させ、これにDCEーGSを投与すると、肝障害は防げることがわかった。(特許)

Research Products

• [Publications] Seiji Tsuboi: "Sー(1,2ーDicarboxyethyl)glutathione and activity for its synthesis in rat tissues." J.Biochem.107. 539-545 (1990)
• [Publications] Seiji Tsuboi: "Inhibition of platelet aggregation by Sー(1,2ーdicarboxyethyl)glutathione,intrinsic tripeptide in liver,heart and lens." Archieves of Biochemistry and Biophysics. 279. 146-150 (1990)
• [Publications] M.Miyazaki: "Enhancing effect of Sー(1,2ーdicarboxyethyl)glutathione on epidermal growth factorーstimulated DNA synthesis in primary cultures of adult rat hepatocytes." Res.Exp.Med.190. 381-387 (1990)
• [Publications] Seiji Tsuboi: "Inhitory effects of Sー(1,2ーdicarboxyethyl)glutathione on collagenーinduced platelet aggregation." Biochim.Biophys.Acta. (1991)