1989 Fiscal Year Annual Research Report
時問分解法と新しい蛍光試薬に基づく超高感度蛍光顕微鏡の開発と応用
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01880030
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
楠見 明弘 東京大学, 教養学部, 助教授 (50169992)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内藤 正幸 オリンパス光学, 機器グループ, 研究員
辻 明彦 浜松ホトニクス, 研究部, 研究員
馬淵 一誠 東京大学, 教養学部, 助教授 (40012520)
山口 和夫 神奈川大学, 理学部, 講師 (20114902)
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| Keywords | 時間分解 / 蛍光 / 顕微 / テルビウム / ユ-ロピウム / キレ-ト |
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| Research Abstract |
蛍光顕微鏡の感度は、現在のところ、光検出器の感度によって限られているのではなく、バックグラウンドが明るく、必要なコントラストが得られないことによって限られている。この限界を打破し、感度の画期的上昇を図るため、本申請の研究においては、長寿命のテルビウム(またはユ-ロピウム)蛍光と時間分解技術(パルスレ-ザ-を光源とし、カメラにゲ-トをかける)を利用して、バックグラウンドを劇的に減少させ、細胞観察において究極の感度を得ることを目的としている。これを達成するため、初年度の平成元年度には以下の研究を行なった。
1.時間分解蛍光顕微鏡の設計。
2.光源部の製作と試験。ゲ-ト付ーMCP付CCDカメラの製作と試験。及びその改良。パルスレ-ザ-とゲ-ト、カメラ読み出し機構の同期調節。
3.テルビウム・ユ-ロピウム試薬の合成。キレ-ト部位としてethylenediamine tefraacetic acidをもつもの、アザクラウンエ-テル型のもの(Nが4個のものと6個のもの)を合成し、アンテナ部分としては、ピレンとフルオレセインをもつものを合成した。現在、それらのスペクトル的性質、蛍光寿命等を単光子計数法を用いて検討中である。
4.励起光による試料に対する悪影響が、もとの設計の装置では観察されたので、励起パルスの周波数を200Hzから1MHzに上昇させることによって、パスル当りのエネルギ-を減少させた。これに伴い、光検出部へのゲ-トの高性能化を現在おこなっている。
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