1990 Fiscal Year Annual Research Report
動物臓器のステロイドホルモン合成に関与するPー450の発現と調節
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02044112
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
大村 恒雄 九州大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80029933)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
WALTER Peter カルフォルニア大学, 医学部, 教授
WATERMAN Mic テキサス大学, 医学部, 教授
阪口 雅郎 九州大学, 大学院医学系研究科, 助手 (30205736)
諸橋 憲一郎 九州大学, 大学院医学系研究科, 助手 (30183114)
伊藤 明夫 九州大学, 理学部, 教授 (30037379)
三原 勝芳 九州大学, 大学院医学系研究科, 助教授 (40029963)
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| Keywords | Pー450 / ステロイドホルモン合成 / 遺伝子発現 / Pー450の生合成 |
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| Research Abstract |
Waterman教授が来日して研究代表者の研究室を訪問し、研究代表者はWaterman教授とWalter教授の研究室を訪問して研究情報を交換し、研究の打ち合せを行なった。その打ち合せに基き、諸橋が2ヶ月間Waterman教授の研究室を訪問して共同研究を行なった。
Pー450の生合成と細胞内局在化については、ミクロゾ-ム型Pー450が生合成時に小胞体膜に組み込まれる機構を無細胞系を用いて解析し、この組み込み過程でシグナルとして機能するアミノ酸配列の構造特性を明らかにした。Pー450分子のアミノ末端に存在するシグナル配列において、アミノ末端の電荷とそれに引き続く疎水性アミノ酸配列のバランスがPー450分子の膜内配向を決定している(三原、阪口、大村)。ミトコンドリア型Pー450については、ミトコンドリアに輸入されたPー450前駆体が正しく切断されて内膜に組み込まれる過程を検討し、前駆体の切断に関与するプロテア-ゼをマトリックスから精製した(伊藤、大村)。
Pー450遺伝子の発現調節については、副腎皮質細胞で発現するPー450に重点を置き、特にウシPー450(11β)遺伝子について詳しい解析を行なった。細胞核抽出液を用いる無細胞転写系により、遺伝子のプロモ-タ-領域に2つの転写活性化塩基配列(Ad1とAd2)が確認され、培養動物細胞への遺伝子導入実験によりPー450(11β)遺伝子のcAMP応答に関与する2つの塩基配列(Ad3とAd4)が確認された。これら塩基配列に特異的に結合する蛋白質因子が細胞核抽出液中に見いだされ、Ad4と結合する蛋白質因子は均一にまで精製された(諸橋、大村)。ラット副腎のPー450(11β)遺伝子の解析も行なわれた。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Sato,T.: "The Aminoーterminal Structure That Determine Topological Orientation of Cytochrome Pー450 in Microsomal Membrane." EMBO Journal. 9. 2391-2397 (1990)
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[Publications] Morohashi,K.: "Enzymatic Activities of Pー450(11β) Expressed by Two cDNAs in COSー7 Cells." Journal of Biochemistry. 107. 635-640 (1990)
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[Publications] Kuroiwa,T.: "Structural Requirements for Interruption of Protein Translocation across Rough Endoplasmic Reticulum Membrane." Journal of Biochemistry. 108. 829-834 (1990)
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[Publications] Ishihara,S: "Molecular Cloning and Sequence Analysisof cDNA Coding for Rat Liver Hemoprotein Hー450" Journal of Biochemistry. 108. 899-902 (1990)
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[Publications] Kirita,S.: "Structural Analysis of Multiple Bovine Pー450(11β) Genes and Their Promotor Activities." Journal of Biochemistry. 108. 1030-1041 (1990)
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[Publications] Honda,S.: "Novel cAMP Regulatory Elements in the Promotor Region of Bovine Pー450(11β) Gene." Journal of Biochemistry. 108. 1042-1049 (1990)
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[Publications] Morohashi,K.: "Tissueーspecific Transcription of Pー450(11β) Gene In Vitro." Journal of Biochemistry. 108. 1050-1056 (1990)
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[Publications] Emi,Y.: "A Different Cytochrome Pー450 Form Is Induced in Primary Cultures of Rat Hepatocytes." Proceedings of National Academy of Science USA. 87. 9746-9750 (1990)
