1990 Fiscal Year Annual Research Report
ネコ免疫不全ウイルスによるエイズの動物病態モデルの確立とその解析
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02235204
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
見上 彪 東京大学, 農学部, 教授 (20091506)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
遠矢 幸伸 東京大学, 農学部, 助手 (20180119)
畔高 政行 東京大学, 農学部, 助手 (10134503)
高橋 英司 東京大学, 農学部, 教授 (50183439)
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| Keywords | ネコ免疫不全ウイルス / ネコエイズ / 病態モデル / 遺伝子クロ-ニング / シ-クエンス / 感染性遺伝子クロ-ン / ネコCD4遺伝子 |
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| Research Abstract |
本研究はネコ免疫不全ウイルス(FIV)とネコの系により,Eトエイズの発症モデルを確立することを最終目標とする。本年度はFIVの遺伝子クロ-ニング,シ-クエンス,蛋白の発現を検討した。
1)FIVの遺伝子クロ-ニングと感染性遺伝子クロ-ンの作製:
我々が分離したFIV TM株の完全長と考えられる遺伝子クロ-ンを得て、制限酵素地図を作製し,アメリカで分離クロ-ニングされたア株と比較したところ,両株は大きく異っていた。またFIVのLTRの塩基配列を比較したところ,日本で分離されたFIV株とアメリカで分離された株の間には顕著な差が見られた。作出した遺伝子両側にLTR構造を取るように遺伝子組換えを行ないFIV TM株の感染性遺伝子クロ-ンを得た。このクロ-ン由来のウイルスはIn vivo,In vitroにおいて感染性を有することが示された。
2)FIV TM株の全遺伝子配列の決定とFIVのgag蛋白発現:
FIV TM2株の遺伝子配列を決定し,オ-プンリ-デイングフレイム(Orf)を調ベた。その結果,gag,pol,envのorfの他にpolとenvの間の中央領域にvifに相当するorfとシステインリフチ領域を含むorfAが,またenvのすぐ下流にはアルギニンリッチ領域を含くむorfBが見られた。また、FIVのgag蛋白を大腸菌に発現させ,ELISAによる抗FIVgag抗体検出の系を確立した。
3)ネコCD4遺伝子のクロ-ニンングと発現:
完全長と思われるネコCD4遺伝子発現プラスミドを作製し,COS細胞でのトランジエントな発現を抗ネコCD4単クロ-ン性抗体で調べたところ,約13%の細胞がネコCD4陽性となり,蛍光強度も比較的強いものであった。
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[Publications] Kawaguchi,Y.et al.: "quantification of feline immunodeficiency virus in a newly estahlished felrne Tーlymphoblastoid cell line(MYAー1 cells)" Arch Virol. 111. 269-273 (1990)
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[Publications] Miyazawa,T.et al.: "Continuous production of feline immunodeficiency virus in a feline Tーlymphoblastoid cell line(MYAー1 cells)" qpn,q,Vet,Su. 52. 887-890 (1990)
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[Publications] Furuya,T.et al.: "Exist&nce of feline immunodeticiency virusin qapunese cat population since 1968" qpn.q.Vet.Sci. 52. 891-893 (1990)
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[Publications] Miyazawa,T.et al.: "Mole culan ctoning of a novel isolafe of feline immunodeficiency virus biolojically and genetically different from the original U.S.isolate" q.Virol.
