1990 Fiscal Year Annual Research Report
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02250224
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
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| Keywords | 蛍光標識 / ウズラ / 酵素 / マンノシダ-ゼ / HPLC |
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| Research Abstract |
αーマンノシダ-ゼの基質特異性をピリジルアミノ(PAー)糖鎖を基質として用いて解析し、酸素の役割等について調べるため、平成2年度に得られた知見について報告する。
1)PAー糖鎖調製のためピリジルアミノ化反応を再検討し、定量的に反応が進行する様にした。
2)基質の調製:オボアルブミンや大福豆より21種類のオリゴマンノ-ス型のPAー糖鎖を調製しHPLCで分離する条件が得られた。
3)PAー糖鎖を用いた活性測定は次の様に行なった:酸素反応混合物をサイズフラクショネ-ションHPLCで各ピ-クを分取し、各々ピ-クはさらに逆相HPLCで分離して、酸素消化物を固定した。
4)ニホンウズラの輸卵管をホモジナイズし、30,000xg上澄を粗酵素液とした。硫安沈殿、DEAEーSephacel,Sephacryl Sー300,mannannーSepharose 4B,hydroxyapatiteカラムクロマトグラフィ-で精製しSDSーPAGEとPAGEで単一のバンドを示す標品を得た。得られた酵素はコバルトイオンを要求し、分子量330,000、至適pH7.0の酵素であった。
4)ウズラ中性αーマンノシダ-ゼはManα1ー3,Manα1ー6残基を水解しManα1ー2残基は水解しにくい事が明らかになった。さらに詳細な解析を行なう予定である。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] A.Kondo: "Improved Method for Fluorescence Lebeling of Suger Chains with Sialic Acid Residues" Agric.Biol.Chem.54. 2169-2170 (1990)
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[Publications] J.Suzuki: "Analysis by Highーperformance Anionーexchange Chromatography of Component Sugars as Their Fluorescent Pyridylamino Derivatives" Agric.Biol.Chem.55. 283-284 (1991)
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[Publications] S.Hase: "The Structure of (Xylose)_2GlcoseーOーSerine 53 Found in the First Epidermal Growth Factorーlike Domain of Bovine Clotting Factor IX" J.Biol.Chem.265. 1858-1861 (1990)
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[Publications] S.Hase: "Estimation of Elution Times on ReverseーPhase HighーPerformance Liquid Chromatography of Pyridylamino Derivatives of Suger Chains from Glycoproteins" Anal.Biochem.184. 135-138 (1990)
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[Publications] H.Oku: "Separation of OligomannoseーType Sugar Chains Having One to Five Mannose Residues by HighーPerformance Liquid Chromatography as Thir Phridylamino Derivatives" Anal.Biochem.185. 331-334 (1990)
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[Publications] T.Mega: "Measurement of LectinーSugar Binding Constants by Microequilibrium Dialysis Coupled with High Performance Liquid Chromatography" J.Biochem.
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[Publications] 長谷 純宏: "新生化学実験講座第3巻糖質I" 東京化学同人, 24 (1990)
