温度感受性レトロウイルスを用いた造血幹細胞株の樹立と分子生物学的解析

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02256205
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 杉山 治夫 大阪大学, 医学部, 助手 (70162906)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中川 雅史 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 相馬 俊裕 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 三宅 正剛 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 小守 寿文 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 岡 芳弘 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
• Keywords: 温度感受性Abelsonウイルス / B細胞の分化 / 免疫グロブリンH鎖遺伝子 / T細胞抗原レセプタ-遺伝子

Research Abstract

我々が分離したAbelsonウイルスが温度感受性変異株でトランスフォ-ムしたマウス未塾B系細胞株SPL2ー1ー2を樹立した。この細胞株は、全く免疫グロブリンを産生していなく、その遺伝子は、V_HDJ_H^ー/Germlineの状態にある。この細胞株は、提温(35℃)で培養すると、増殖するのみであるが、培養温度を高温(39℃)に上げると、細胞は、transformed stateからuntransformed stateにかわり、それによって、分化が誘発される。まず免疫グロブリンH鎖遺伝子の再構成が起こり、Germline Allele上で、DtoJ_H結合、つづいて、V_HtoDJ_H結合が起こる。そして、約2ヵ月め39℃での培養で、ほぼ100%の細胞で、DJ_H結合及び、V_HDJ_H結合がおこる。このDtoJ_H結合に際し、12コのD geneのうち、どのD geneが最もよく使用されるのかを、解析したところ、もっとも5'側にあるD_<FL16.1>と、もっとも3'側にあるD_<Q52>の2種のD geneが、最も頻回に、使用されることがわかった。なぜ、最も5'側のDと、もっとも3'側のDが、頻回に使用されるのかは、不明である。また、39℃での培養中、免疫グロブリンH鎖遺伝子とともに、T細胞抗原レセプタ-γ鎖(TCRγ)遺伝子の再構成も起り、約12ヵ月で100%の細胞で、TCRγ遺伝子の再構成が起った。そして、この再構成の大部分は、V_<γ2>toJ_<γ2>結合であった。このjoiningの多くは、normalーsized mRNAを産生していた。inーframeの再構成も見い出しているが、タンパクにまでなっているかは、検討中である。

Research Products

• [Publications] SUGIYAMA,H.: "V_HDJ_H to J_H Joining in not blocked in μーchainーproducing Preーβ cells" J.Immunogenetics. 17. 618-622 (1990)
• [Publications] OKA,Y: "Immature β Cells can pass through a V_H DJ_H/Germ line state in the IgH chain gene rearrungements" J.Immunol.145. 361-364 (1990)
• [Publications] OKA,Y: "Unliked regulation of Cell growth and differentiation in immature β cell lines" Celluar Immunol. 130. 42-49 (1990)
• [Publications] TSUKADY,S.: "estimation of D.Segment usage in initial D to J_H Joinings in a muiner immature β cell line" J.Immunol.144. 4053-4059 (1990)
• [Publications] MIYAKE,S: "Identification of a recombinational signal sequenceーspecific DNAーbinding proteins (s) of Mr.115,000 in the muclear extracts from immature lymphoid cell lines." J.Immunogenetics. 17. 67-69 (1990)
• [Publications] MINAMI,Y: "Monochonal anti VH141 antibodies shat specifically recognize heavy chain variable region of and closely related to MOPC141 myeloma srotein whose VH gene belongs to VHO52 family" Immunology. (1991)
• [Publications] 岡 芳弘: "医学のあゆみ" 医歯薬出版株式会社, 5 (1991)