1990 Fiscal Year Annual Research Report
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02263104
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
西村 善文 横浜市立大学, 大学院総合理学研究科, 教授 (70107390)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
陶山 明 長岡技術科学大学, 工学部, 助教授 (90163063)
上杉 晴一 大阪大学, 薬学部, 助教授 (70028851)
神藤 平三郎 東京薬科大学, 薬学部, 助教授 (80138966)
京極 好正 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (90012632)
水野 猛 名古屋大学, 農学部, 教授 (10174038)
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| Keywords | DNA結合タンパク質 / ラマン分光 / NMR / 高次構造 / DNAの湾曲 / Mybタンパク質 / OmpR |
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| Research Abstract |
○蛋白質が認識するDNA構造の班として次の事を解明した。
1.塩基配列特異的にDNAと結合するタンパク質として,原がん遺伝子mybの産物Mybタンパク質のDNA結合ドメインの大腸菌大量発現系を作成し,精製法を確立した。そのタンパク質のラマンスペクトルを測定し,その結果,αーヘリックスが存在する事,トリプトファンが疎水的な環境にある事を見出し,これらの実験と部位特異的突然変異の実験とをもとにして,トリプトファンクラスタ-という新しいタイプのDNA結合モチ-フを提案した。
2.上記トリプトファンクラスタ-の結合モチ-フを大量に化学合成し,2次元NMRの測定をおこない,水溶液中の3次元立体構造解析を行なった。
3.DNAオリゴマ-の水溶液中の3次元立体構造解析を,ラマンスペクトル,NMRスペクトルの測定結果について,制限付分子動力学計算を行ないえた。塩基配列はCCTTAAGGである。
4.大腸菌の外膜タンパク質OmpFとOmpCの発現を培地浸透圧に対応して制御するOmpRは,リン酸化によってompFとompCの両遺伝子のプロモ-タ-に強く結合するようになる事が判った。このリン酸化は,外膜タンパク質のEnvZによっておこる。
5.大腸菌から,特に強く湾曲したDNAに結合するタンパク質を見出した。このタンパク質は湾曲してないDNAには結合せず,DNAの立体構造を認識しているものと思われる。このタンパク質は結果的に,従来報告されているHーNSであった。
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[Publications] 石井 知恵: "The Tryptophan Cluster:A Hypothetical Structure of the DNAーbinding Domain of the myb Protooncogene Product" J.Biol.Chem. 265. 19990-19995 (1990)
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[Publications] 伊藤 暢聡: "Structure of DNA Octamer,d(CCTTAAGG)_2 Obtained by Restrained Molecular Dynamics Based on Raman and NMR Data" J.Mol.Stucture. 242. 119-133 (1991)
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[Publications] 宇野 公之: "Spectrophotometric and Resonance Raman Studies on the Formation of Phenolate and Thiolate Complexes of (Octaethylporphinato)tron(III)" Inorganic Chemistry. 29. 2803-2807 (1990)
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[Publications] 山田 寿美: "An Escherichia coli Protein That Prefentially Binds to Sharply Curred DNA" J.Biochem.108. 420-425 (1990)
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[Publications] 金丸 研吾: "Transmembrane Signal Transduction and Osmoregulation in Escherichia coli;I.Analysis by SiteーDirected Mutagenesis of the Amino Acid Residues Involved in Phosphotransfer" J.Biochem.108. 483-487 (1990)
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[Publications] 小田井 修: "Synthesis and NMR Study of Ribooligonucleotides Forming a Hammerheadーtype RNA Enzyme System" Nucleic Acids Res.18. 5955-5960 (1990)
