バクテロイデス・ジンジバリスの産生する生物活性物質の性質とその歯周病病原性

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02404078
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 中村 亮 徳島大学, 歯学部, 教授 (30034169)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 寺井 浩 徳島大学, 歯学部附属病院, 助手 (30197785) ; 日野出 大輔 徳島大学, 歯学部, 助手 (70189801) ; 永田 篤司 徳島大学, 歯学部, 助手 (70228021) ; 木戸 玲子 徳島大学, 歯学部附属病院, 講師 (30181605) ; 佐藤 誠 徳島大学, 歯学部, 助教授 (10126229)
• Keywords: バクテロイデス・ジンジバリス / トリプシン様プロテア-ゼ / 非トリプシン様プロテア-ゼ / 歯周病病原因子 / 赤血球凝集因子

Research Abstract

嫌気培養したバクテロイデス・ジンジバリス(<B.gingivalis>___ー)を遠心により分離し、培養上清からカゼイン分解活性を有する三つの画分を分離精製した。赤血球凝集因子は同じく<B.gingivalis>___ーの培養上清より、ヒト赤血球より作製したゴ-スト細胞を用いて分離抽出した。カゼイン分解活性を有するプロテア-ゼは、それぞれPaseーA,ーB及びーCとし、それぞれの性質を調べた。
三つのプロテア-ゼの至適pHはいずれも中性域に存在し、pH6.5〜7.5の間に認められた。PaseーAはトリプシン活性測定用の人工基質には全く作用せず、セリンプロテア-ゼ阻害剤であるPSMF及びDiPFに強力に阻害された。一方、PaseーCはSHに対する依存性が非常に強いが、基質に対する特異性は牛膵トリプシンと全く同様で、ペプチド結合のアルギニンならびにリジンのC側に作用し切断する。トリプシンに比べれば、リジンに対する作用はアルギニンに対するよりも弱い。PaseーBのSH依存性はPaseーCと同様か、むしろ強い。しかし、ペプチド結合のアルギニンC側は切断するが、リジンのC側には作用しない。以上の性質はプロテア-ゼ阻害剤による検索でも顕著である。即ち、PaseーAは典型的なセリンプロテア-ゼであるが、完全に非トリプシン様である。PaseーBとーCはチオ-ルプロテア-ゼであるが、基質特異性からみるとPaseーCはトリプシン様であり、PaseーBは多少異なる。一方、赤血球凝集因子は、界面活性剤を用いないで赤血球ゴ-ストに対する親和性により抽出すると、トリプシン様の活性を残している。この物質は電子顕微鏡で観察すると、ベジクル様のものであり、トリプシン様の酵素がベジクル構成成分に存在するとの報告と一致する。PaseーCには赤血球凝集活性と、コラ-ゲン分解酵素が存在し、この物質と別に抽出した赤血球凝集因子との異同について今後明らかにしていきたい。

Research Products

• [Publications] 日野出 大輔、永田 篤司、林 祐行、嶋田 順子、佐藤 誠、中村 亮: "Bacteroides gingivalis由来の3種のプロテア-ゼによる生体タンパク質の分解特性" 口腔衛生学会雑誌. 40. 584-585 (1990)
• [Publications] 寺井 浩、萬好 都美恵、木戸 玲子、佐藤 誠、中村 亮: "歯周ポケット浸出中のコラゲナ-ゼ様及びトリプシン様酵素活性について" 口腔衛生学会雑誌. 40. 586-587 (1990)
• [Publications] H.Hayashi,M Sato and R.Nakamura: "Isolation of human Erythrocyte Receptor protein for Hemagglutinin of Bacteroides gingivalis" Abstracts for International Conference on Periodontal Disease. 57 (1990)
• [Publications] D.Hinode,H.terai and R.Nakamura: "Differntial Purification and Characterization of Three Proteases from Culture Supernatants of <Bacteroides gingivalis>___ー" Abstracts for International Conference on Periodontal Disease. 66 (1990)
• [Publications] R.Nakamura,D.Hinode,H.Terai and M.Morioka: "Periodontal Disease:Pathogens & Host Immune Responses Edited by S.Hamada,S.C.Holt & J.R.McGhee" Quintessence Publishing Co.,Ltd., (1991)