1992 Fiscal Year Annual Research Report

膜蛋白SecYのポリペプチドトランスロケーター機能の追求

Research Project

Project/Area Number	02404087
Research Institution	KYOTO UNIVERSITY
Principal Investigator	伊藤維昭京都大学, ウィルス研究所, 教授 (90027334)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	秋山芳展京都大学, ウィルス研究所, 助手 (10192460)
Keywords	タンパク質分泌 / タンパク質膜透過 / SecY / SecE / 優性変異 / ペリプラズム / タンパク質のおりたたみ / ジスルフィド結合
Research Abstract	SecY優性欠損変異の解析から,細胞質領域C5を中心としたC末端側にSecY活性に重要な部位があることを提唱,優性欠損効果を打ち消すような遺伝子内抑制変異の分離・解析などから他の因子との相互作用に関わる部位がSecYの中央部位のC4からTM7にかけての領域に存在する事を示唆した.相互作用領域にマップされるミスセンス変異secY24はSecEとの相互作用を弱めるものである事を,免疫共沈降,可剰SecY24に対するSecEによる安定化効果の喪失から示した.またSecD,SecF,およびその上流に存在するORF12の過剰発現によりsecY変異株の表現型がpositiveまたはnegativeな影響を受け,ORF12にはSecE同様の過剰のSecY安定化効果および以優性欠損secY変異に対するサプレッション効果があった.優性欠損変異に対するマルチコピーサプレッションの解析により新しい遺伝子ydrの産物がSecYと相互作用を持つ事を示唆した.YdrがSecYと相互作用を持つ事を更に,secY24変異株中でydrの過剰発現が著しい分泌と増殖阻害をもたらすこと,ydrの同時過剰生産により過剰生産SecYが安定化されることから示唆した.塩基配列決定によりYdrが181アミノ酸残基よりなる親水性タンパク質であり,C末端が両親媒性αヘリックスをとり得ること,ゆるやかに膜に結合していることを示した.過剰SecYの迅速な分解により細胞内において安定なSecY複合体の存在量が一定に保たれていることを,SecY-LacZα融合体による競合実験で示した.膜蛋白質の“stop transfer"配列の膜へのアンカリング効率が低下したstd変異株を分離し,変異がftsH遺伝子に起こったものであることを示し,そのATPase結合部位が機能に重要である事,FtsHが蛋白質膜透過自体にも役割を持つ事等を明らかにした.

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Kamitani,S.,Akiyama,Y.,and Ito,K.: "Identification and characterization of an Escherichia coli gene required for the formation of correctly folded alkaline phosphatase,a periplasmic enzyme." EMBO J.11. 57-62 (1992)
[Publications] Ueguche,C.,and Ito,K.: "Multicopy suppression:an approach to understanding intracellular functioning of the protein export sys-tem." J.Bacteriol.174. 1454-1461 (1992)
[Publications] Shimoike,T.,Akiyama,Y.,Baba,T.,Taura.T.,and Ito,K.: "SecY variants that interfere with Escherichia coli protein export in the presence of normal secY." Mol.Microbiol.6. 1205-1210 (1992)
[Publications] Ito,K.: "SecY and integral membrane components of the Escherichia coli portein translocation system." Mol.Microbiol.6. 2423-2428 (1992)
[Publications] Taura,T.,Ueguche,C.,Shiba,K.,and Ito,K.: "Insertional disruption of the nusB gene leads to coldsensitive growth and suppression of the secY24 mutation." Mol.Gen.Genet.234. 429-432 (1992)
[Publications] Akiyama,Y.,Kamitani,S.,Kusukawa,N.,and Ito,K.: "In vitro catalysis of oxidative folding of disulfidebonded proteins by Escherichia coli dsbA(ppfA)gene product." J.Biol.Chem.267. 22440-22445 (1992)
[Publications] Akiyama,Y.,and Ito,K.: "Folding and assembly of bacterial alkaline phosphatase in vitro and in vivo." J.Biol.Chem.268. (1993)

1992 Fiscal Year Annual Research Report

膜蛋白SecYのポリペプチドトランスロケーター機能の追求

Principal Investigator

伊藤 維昭 京都大学, ウィルス研究所, 教授 (90027334)

Research Products

[Publications] Kamitani,S.,Akiyama,Y.,and Ito,K.: "Identification and characterization of an Escherichia coli gene required for the formation of correctly folded alkaline phosphatase,a periplasmic enzyme." EMBO J.11. 57-62 (1992)

[Publications] Ueguche,C.,and Ito,K.: "Multicopy suppression:an approach to understanding intracellular functioning of the protein export sys-tem." J.Bacteriol.174. 1454-1461 (1992)

[Publications] Shimoike,T.,Akiyama,Y.,Baba,T.,Taura.T.,and Ito,K.: "SecY variants that interfere with Escherichia coli protein export in the presence of normal secY." Mol.Microbiol.6. 1205-1210 (1992)

[Publications] Ito,K.: "SecY and integral membrane components of the Escherichia coli portein translocation system." Mol.Microbiol.6. 2423-2428 (1992)

[Publications] Taura,T.,Ueguche,C.,Shiba,K.,and Ito,K.: "Insertional disruption of the nusB gene leads to coldsensitive growth and suppression of the secY24 mutation." Mol.Gen.Genet.234. 429-432 (1992)

[Publications] Akiyama,Y.,Kamitani,S.,Kusukawa,N.,and Ito,K.: "In vitro catalysis of oxidative folding of disulfidebonded proteins by Escherichia coli dsbA(ppfA)gene product." J.Biol.Chem.267. 22440-22445 (1992)

[Publications] Akiyama,Y.,and Ito,K.: "Folding and assembly of bacterial alkaline phosphatase in vitro and in vivo." J.Biol.Chem.268. (1993)

伊藤維昭京都大学, ウィルス研究所, 教授 (90027334)