1991 Fiscal Year Annual Research Report
PQQーliberating enzgmeを用いるPQQ付加体の解析法の確立
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02454063
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
足立 収生 山口大学, 農学部, 教授 (20027189)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
品川 恵美子 宇部工業高等専門学校, 助教授 (20116726)
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| Keywords | ピロロキノリンキノン / キノプロテイン / 補酵素 |
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| Research Abstract |
PLEの単離 PQQを生育に要求する菌度,Pseudomonassp.VMー15C及び,PQQ合成欠損変異株,Acinetoーbacter calcoaceticusからPLEをそれぞれ単離精製した。それらをPQQー付加体と反応させてPQQの遊離の起ることを確認した。本研究において,試料中に含まれる遊離のPQQによるPLE反応の抑制を排除して測定することが,最も重要であることが判明した。PQQは反応性が高いために,容易にほとんどすべての蛋白に非共有結合で結合し,測定に際して遊離し,測定を防害する恐れがあるからである。これらを考慮して,PLEや他の蛋白に遊離のPQQを保持させないように,あらかじめPLEなどを高い塩濃度で処理することで、それらのPQQを除去できることを明らかにした。次に,PQQを補酵素としている酵素のうち,PLEの存在するところには常に存在する酵素,グルコ-ス脱水素酵素,ポリビニルアルコ-ル脱水素酵素などから容易にPQQが移動する現象を見出した。これもまたPQQの測定を防害する要因にあげられるからである。これらの酵素にはPQQが非共有給合で補酵素として存在しているが,理化学的環境条件の変化で,PQQは容易に脱離する。これら上記の2つの要因を加えてもなおPQQの生成量が,PLE反応の反応時間,基質濃度,PLE濃度に依存することを証明した。また,PLEを熱処理すると,PQQ生成が完全に停止することも明らかにした。
上記の結果の一部は第2回国際PQQシンポジウムにも発表し,今後の検討課題について多数の研究者の意見を得ることができた。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] Y.Hamagishi,S.Murata,H.Kamei,T.Oki,O.Adachi & M.Ameyama: "New Biological Properties of Pyrroloquinoline Quinone and its Related Compounds;Inhibition of Chemiluminescence,Lipid Peroxidation and Rat Paw Edema" J.Pharm.Exp.Ther.225. 980-985 (1991)
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[Publications] 足立 収生,飴山 實: "ピロロキノリンキノンの生化学的ならびに生理学的機能" ビタミン. 65. 505-510 (1991)
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[Publications] K.Matsushita,Y.Nagatani E.Shinagawa,O.Adachi & M.Ameyama: "Reconstitution of the Ethanol Oxidase Respiratory Chain in Membranes of Quinoprotein Alcohol Dehydrogenaseーdeficient Gluconobacter suboxydans subsp.αStrains" J.Bacteriol.173. 3440-3445 (1991)
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[Publications] K.Matsushita,Y.Takaki,E.Shinagawa,M.Ameyama,& O.Adachi: "Ethanol Oxidase of Acetic Acid Bacteria.Reactivity wtith Ubiquinone of Pyrroloquinoline Quinoneーdependent Alcohol Dehydrogenases purified from Acetobacter aceti and Gluconobacter suboxydans" Bioscie.Biotech.Biochem.56. 304-310 (1992)
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[Publications] T.Hisano,K.Murata,A.Kimura,K.Matsushita & O.Adachi: "Further Properties of Spermidine Dehydrogenase from Citrobacter freundii IFO 12681" Bioscie.Biotech.Biochem.56. 311-314 (1992)
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[Publications] M.Ameyama,K.Matsushita,E.Shinagawa & O.Adachi: "Biochemical and Physiological Functions of Pyrroloquinoline Quinone in “Vitamins and Hormones" Vol.46" Academic Press,Inc., 229-269 (1991)
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[Publications] M.Ameyama and O.Adachi: "Biochemical and Physiological Functions of Pyrroloquinoline Quinone in “Enzymes Dependent on Pyridoxal Phosphate and Other Caronyl Compounds as Cofactors"" Pergamon Press, 465-473 (1991)
