心筋症・心筋炎における自己免疫機序の解明ー抗心筋モノクロ-ナル抗体による解析ー

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02454255
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 松森 昭 京都大学, 医学部, 講師 (70135573)
• Keywords: 心筋症 / 心筋炎 / ウイルス / 自己抗体 / 抗心筋抗体 / 自己免疫 / モノクロ-ナル抗体 / ハイブリド-マ

Research Abstract

心筋症における抗心筋抗体の病因的意義を検討することを目的とし、心筋症発症マウス血清中の抗心筋自己抗体の解析を行った。4週令Balb/cマウスにEncephalomyocarditis(EMC)ウイルスを接種、心筋炎を作製し、ウイルス接種4,7,10,14,21,28,90日後に血清を採取した。血清は同系正常マウス心臓の凍結切片と反応させ、2次抗体としてFITC標識抗マウスIgGを使用し、蛍光抗体間接法を実施した。IgG型抗心筋抗体はウイルス接種4日後より出現し、21日後に最高値に達し、その後抗体価は減少するが、90日後にも認められた。抗心筋モノクロ-ナル抗体の作製のため、自己抗体も最も高値を示す21日後に脾臓を摘出し、脾細胞を骨髄腫細胞と細胞融合しハイブリド-マを作製した。培養上清を正常マウス心臓の凍結切片を用いた蛍光抗体間接法によりスクリ-ニングし結果、3種のクロ-ンが得られ、クロ-ンIA5は心筋の太い横紋状に、クロ-ンIIIA4は細い横紋状に、クロ-ンIB5は心筋細胞表面を染める染色性を示した。これらの抗体はいずれもIgMであることが明らかとなった。各クロ-ンはBalb/cマウス腹腔内に接種し、その腹水から液体クロマトグラフィ-により抗体を精製した。次年度は、精製したモノクロ-ナル抗体をウエスタンブロット法により自己抗原との反応性を検討し、また、心筋症モデルマウス心筋の切片を用いモノクロ-ナル抗体による蛍光抗体法、酵素抗体法により心筋内の抗原分布を明らかにする。また、抗体の種特異性の有無、とくにヒトとの交叉反応性を検討し、陽性の場合は同抗体を用いてヒト心筋症、心筋炎の生検標本、剖検心において染色性を検討する予定である。また、新生児マウス心筋細胞を培養し、培養液中に各抗心筋モノクロ-ナル抗体を加え細胞障害発生の有無を検討することにより心筋症発症における抗心筋抗体の病因的意義を明らかにする。

Research Products

• [Publications] Tamaki N: "Indiumー111ーantimyosin antibody imaging for detecting different stages of myocardial infarction:Comparison with technetiumー99m pyrophosphate imaging." J Nucl Med. 31. 136-142 (1990)
• [Publications] Matsumori A: "Cardiomyopathy." Asian Med J. 33. 275-282 (1990)
• [Publications] Matsumori A: " ^<111>In monoclonal antimyosin antibody imaging:Imaging of myocardial infarction and myocarditis." Jpn Circ J. 54. 333-338 (1990)
• [Publications] Matoba Y: "A case of biopsyーproven myocarditis progressing to autopsyーproven dilated cardiomyopathy." Clin Cardiol. 13. 732-737 (1990)
• [Publications] Yamada T: "Pharmacokinetics of indiumー111ーlabeled antimyosin monoclonal antibody in murine experimental viral myocarditis." J Am Coll Cardiol. 16. 1280-1286 (1990)
• [Publications] Okada I: "The viral gemone in experimental murine coxsackievirus B3 myocarditis:A northern blotting analysis." J Mol Cell Cardiol. 22. 999-1008 (1990)
• [Publications] Matsumori A: "Persistent uptake of indiumー111ーantimyosin monoclonal antibody in patients with myocardial infarction." Am Heart J. 120. 1026-1030 (1990)
• [Publications] Matoba Y: "The effect of cyclosporine on the immunopathogenesis of viral myocarditis in mice." Jpn Circ J.
• [Publications] Matsumori A: "Immunomodulating therapy in viral myocarditis:Effects of tumor necrosis factor,interleukinー2 and antiーinterleukinー2 receptor antibody in an animal model." Eur Heart J.
• [Publications] Yamada T: "Detection of adriamycin cardiotoxicity with indiumー111 labeled antimyosin monoclonal antibody imaging." Jpn Circ J.
• [Publications] Matsumori A: "Pathogenesis of myocardial injury in myocarditis and cardiomyopathy." Jpn Circ J.
• [Publications] Tominaga M: "βーblocker treatment of dilated cardiomyopathy:Beneficial effect of carteolol in an animal model." Circulation.
• [Publications] Matsumori A: "Prognostic significance of indiumー111 antimyosin antibody uptake in patients with dilated and hypertrophic cardiomyopathy." Int J Cardiol.
• [Publications] Matsumori A: "The effect of betaーadrenergic blockade in dilated cardiomyopathy." Heart and Vessels.
• [Publications] 山田 武彦: " ^<111>Inー標識抗ミオシンモノクロ-ナル抗体ーFabイメ-ジングの臨床応用(第4報):急性心筋梗塞における再潅流の影響" 核医学. 27. 133-138 (1990)
• [Publications] 山田 武彦: " ^<111>Inー標識抗ミオシンモノクロ-ナル抗体ーFabイメ-ジングの臨床応用(第5報):反復検査における画像の変化、安全性の検討" 核医学. 27. 765-772 (1990)
• [Publications] 松森 昭: "心筋症・心筋炎における ^<111>Inー標識抗ミオシンモノクロ-ナル抗体シンチグラフィ-" 核医学. 27. 1129-1134 (1990)
• [Publications] 松森 昭: " ^<111>InーAntimyosin Fabを用いた心筋シンチグラフィの臨床応用(多施設による共同研究)" 核医学. 27. 1419-1432 (1990)
• [Publications] Matsumori A: "In Proceeding of the 2nd international symposium on cardiomyopathy and myocarditis.Morphological features and electric disturbances in experimental viral myocarditis." University of Tokyo Press, 6(pp.217-222) (1990)
• [Publications] Matsumori A: "In advances in cardiomyopathies.Experimental viral myocarditis:Immunopathogenetic aspects." SpringerーVerlag, 9(pp.181-189) (1990)
• [Publications] Matsumori A: "In Cardiomyopathy Uptake 4.Cardiomyopathy:Its metabolic and molecular aspects.Antimyosin monoclonal antibody uptake in myocarditis:Clinical and experimantal studies." University of Tokyo Press,
• [Publications] 松森 昭: "Annual Review 循環器 1990 心筋炎から心筋症へ" 中外医学社, (1990)
• [Publications] 松森 昭: "Annual Review 循環器 1991 心筋炎の免疫抑制療法" 中外医学社, (1991)