全長デスモプラキンcDNAのクロ-ニングとその分子構造解析および遺伝子マッピング

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02454280
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 橋本 隆 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (20129597)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 工藤 純 慶応義塾大学, 医学部, 助手 (80178003) ; 清水 信義 慶応義塾大学, 医学部, 教授 (50162706) ; 田中 勝 慶応義塾大学, 医学部, 助手 (40188339) ; 西川 武二 慶応義塾大学, 医学部, 教授 (50051579)
• Keywords: 表皮 / 細胞間接着 / デスモソ-ム / デスモヨ-キン / 分子生物学 / 生化学

Research Abstract

私共はウシ鼻表皮デスモソ-ムで免疫したマウスリンパ球を用いてモノクロナ-ル抗体を作成した。この抗体はデスモソ-ム接着板に反応することより抗デスモプラキン抗体と考えられたが、その後の詳細な分子量の測定の結果、最近確認された新しいデスモソ-ム構成蛋白デスモヨ-キンに反応することが判明した。この抗体による免疫スクリ-ニングにてマウス表皮細胞cDNAライブラリ-より9種の陽性クロ-ンを得た。これらのクロ-ンは約14kbのmRNAとハイブリダイズすることより、最近報告された8kbないし9kbのデスモプラキンと明らかに異なる。これらのクロ-ンのうち最大の3.2kbインサ-トを有するクロ-ン6をpBluescriptにサブクロ-ニングし、ExoIII/Mung bean nucleaseにより種々のデレ-ション変異株を作成後、dsDNAないしssDNAをSangerのジデオキシチェ-ンタ-ミネ-ション法により塩基配列を決定し、更に、アミノ酸配列を決定した。この結果、このクロ-ンは1060アミノ酸よりなるORFを有していた。これらのDNAおよびアミノ酸配列はほかのデスモソ-ム蛋白を含む既報告とまったく相同性を認めず、33から66アミノ酸よりなる著明な相同性を有する6個の繰り返し配列を有していた。以上より、このクロ-ンはデスモヨ-キンをコ-ドし、この蛋白はデスモソ-ム形成上重要な全く新しい構造を有していることが示された。今後、ほかの8クロ-ンの解析を進めると共に、PCRないしプライマ-伸長法により5'及び3'にむけて伸長する。また、異なる抗体により他部位のクロ-ンを単離し、全長cDNAを明らかにし、この蛋白の遺伝子および分子構造を解析する。同時にセルソ-タ-によりソ-ティングしたヒト染色体を用いてヒト染色体へのマッピングをする予定である。