1991 Fiscal Year Annual Research Report

血小板情報変換酵素ホスホリパ-ゼCとGTP結合タンパク質の分子多様性と相互作用

Research Project

Project/Area Number	02454544
Research Institution	Gifu University
Principal Investigator	野沢義則岐阜大学, 医学部, 教授 (10021362)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	坂野喜子岐阜大学, 医学部, 助手 (50116852) 金保安則岐阜大学, 医学部, 助手 (00214437) 岡野幸雄岐阜大学, 医学部, 助教授 (10177066)
Keywords	情報変換酵素 / ホスホリパ-ゼC / 血小板 / GTP結合蛋白質 / 分子多様性
Research Abstract	ヒト血小板には数種類のイノシト-ルリン脂質特異的ホスホリパ-ゼC(PIーPLC)が存在しており、種々のカラムクロマトグラフィ-でPLC活性画分を分離し、各種アイソザイムの抗体を用いて同定を行った。サイトゾル画分にはPLCーβ,PLCーγ,PLCーδと未同定の二種類の存在が確認された。PLCーγの活性調節にはチロシンキナ-ゼによるリン酸化の関与が明らかにされており、ヒト血小板にはsrcが多量に発現していることより、srcによるPLCーγのチロシンリン酸化について検討した。トロンビン刺激によりチロンシンキナ-ゼが活性化され、ホスホチロシン抗体を用いたウエスタンブロットにより数種類の蛋白質(130,105,98,85,78kDa)のチロシンリン酸化が観察された。またトロンビン刺激後PLCーγの抗体を用いて免疫沈降を行い、チロシンリン酸化について検討したがPICーγのリン酸化は確認されなかった。また、ヒト血小板のPLCーγは細胞骨格系アクチン・ゲルゾリン複合体と結合をしていることが示され、ゲルゾリンのPLCーγの活性調節への関与が示唆された。一方、ヒト血小板には多種類のGTP結合タンパク質が存在しており、百日咳毒素非感受性GTP結合タンパク質であるGqの存在が、特異抗体を用いたウェスタンブロットにより確認された。また、PLCーβも膜画分に多く検出され、PLCーβの活性調節におけるGqの関与が示唆された。ヒト血小板には数種類の低分子量型GTP結合タンパク質が存在し、そのなかでも、サイトゾル画分から精製されたc25KGは、新規GTP結合タンパク質であることが、部分アミノ酸配列から明らかにされた。さらに、本タンパク質の合成オリゴペプチドを用いて、巨核球ライブラリ-からcDNAをクロ-ニングした(ramと命名)。このcDNAを大腸菌で発現させて多量のramP^<25>を得た。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Nozawa,Y.: "Phospholipidーmediated signaling in receptor activation of human platelets" Biochim.Biophys.Acta. 1082. 219-238 (1991)
[Publications] Nakashjma,S.: "Thrombin induced a biphasic 1,2ーdiacylglycerol production in human platelets" Biochem.J.275. 355-361 (1991)
[Publications] Nakashima,S.: "Genisteine,a protein tyrosin kinase inhibitor,inhibits thromboxane A2ーmediated humna platlet responses" Mol.Pharmacol. 39. 475-480 (1991)
[Publications] Suzuki,T.: "Partial purification and characterization of two forms of phosphatiーdylinositol 4ーphosphate 5ーkinase from human platelet" Thrombosis Res.64. 45-56 (1991)
[Publications] Banno,Y.: "Isolation of a polyphosphoinositideーphospholipase C(Type)" Platelets.
[Publications] Banno,Y.: "Effects of human platelet cyt競solic phosphoinositide phospholipase C isozymes" J.Biol.Chem.
[Publications] Nozawa,Y.: "Phosphatidylinositolーspecific phospholipase C from human platelet Methods Enzymol.Vol.197" Acadmic Press,New York, 9 (1991)
[Publications] 中島茂: "血小板活性化とイノシト-ルリン脂質代謝血小板活性化の生化学" 金芳堂, 22 (1991)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

血小板情報変換酵素ホスホリパ-ゼCとGTP結合タンパク質の分子多様性と相互作用

Principal Investigator

野沢 義則 岐阜大学, 医学部, 教授 (10021362)

Research Products

[Publications] Nozawa,Y.: "Phospholipidーmediated signaling in receptor activation of human platelets" Biochim.Biophys.Acta. 1082. 219-238 (1991)

[Publications] Nakashjma,S.: "Thrombin induced a biphasic 1,2ーdiacylglycerol production in human platelets" Biochem.J.275. 355-361 (1991)

[Publications] Nakashima,S.: "Genisteine,a protein tyrosin kinase inhibitor,inhibits thromboxane A2ーmediated humna platlet responses" Mol.Pharmacol. 39. 475-480 (1991)

[Publications] Suzuki,T.: "Partial purification and characterization of two forms of phosphatiーdylinositol 4ーphosphate 5ーkinase from human platelet" Thrombosis Res.64. 45-56 (1991)

[Publications] Banno,Y.: "Isolation of a polyphosphoinositideーphospholipase C(Type)" Platelets.

[Publications] Banno,Y.: "Effects of human platelet cyt競solic phosphoinositide phospholipase C isozymes" J.Biol.Chem.

[Publications] Nozawa,Y.: "Phosphatidylinositolーspecific phospholipase C from human platelet Methods Enzymol.Vol.197" Acadmic Press,New York, 9 (1991)

[Publications] 中島 茂: "血小板活性化とイノシト-ルリン脂質代謝 血小板活性化の生化学" 金芳堂, 22 (1991)

野沢義則岐阜大学, 医学部, 教授 (10021362)

[Publications] 中島茂: "血小板活性化とイノシト-ルリン脂質代謝血小板活性化の生化学" 金芳堂, 22 (1991)