1992 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子増幅法を用いた植物ウイルス・ウイロイドの高感度遺伝子診断法の実用化
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02556007
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| Research Institution | HOKKAIDO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
四方 英四郎 北海道大学, 名誉教授 (00001389)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉本 宣敬 有機合成薬品工業(株), 生化学研究室, 室長
大島 一里 佐賀大学, 農学部, 助手 (00176869)
上田 一郎 北海道大学, 農学部, 助教授 (10113523)
小島 誠 新潟大学, 農学部, 教授 (00001454)
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| Keywords | PCR / 遺伝子診断 / 植物ウイルス / 塩基配列 / マイクロハイブリダイゼーション |
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| Research Abstract |
1)ジャガイモYウイルスとホップ潜在ウイロイドについて、PCRとDIG標識核酸プローブを用いたマイクロプレートハイブリダイゼーション法による遺伝子診断を確立した。圃場でジャガイモYウイルスに感染したジャガイモを常法のELISA、PCR、およびマイクロプレート法で検定。ELISAで検出できない感染株でもPCRとマイクロプレート法で検出できた。更にマイクロプレート法はPCRより検出感度が10倍優れていた。
2)イネラギッドスタントウイルス変異株の変異遺伝子(ゲノムセグメント9)をRTーPCRとSSCP(Single-strand conformation polymorphisms)によって識別・検出する方法を確立した。保毒虫ー頭から抽出した核酸の1/2量より合成したcDNAの1/100量あるいは感染イネ1mg分より合成したcDNAの1/50量からでも充分にPCR検定が可能であった。
3)ジャガイモ葉巻ウイルス外被蛋白質で形質転換したジャガイモより抽出したゲノムDNAを鋳型として、PCRとマイクロプレートハイブリダイゼーションで、導入された遺伝子の検出に成功した。
4)PCR法増幅の鋳型はDNAなので、検定植物よりウイルスRNAを抽出してより簡便にcDNAを調製する方法を確立することがPCRによる遺伝子診断法の基本となる。ジャガイモYウイルス、ジャガイモ葉巻ウイルス、イネ萎縮ウイルス、クローバーイエローベインウイルスについてウイルスゲノムRNAの直接簡易抽出法とcDNA調製法を確立してPCRによる遺伝子診断法を確立した。
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[Publications] J.Yan: "Conserued terminal seguences of rice ragged stunt irrus genonaic RNA" Journal of general Virology. 73. 785-789 (1992)
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[Publications] F.Azuhata: "Conserued terminal nucleotide sequentes in the genome of rice flack streaked dwarf irrus." Journal of general Virology. 73. 1593-1595 (1992)
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[Publications] I.Uyeda: "Bean yellow mosaic irrus sufgroup:searck for the group specific sequentes in the 3'terminal region of the genome." Archiues of Virology. Sup.5. 377-385 (1992)
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[Publications] Y.Sano: "On the rariafility of the 3'terminal sequences of the turnip mosaic virus genome." Archiues of Virology. 126. 231-238 (1992)
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[Publications] T.Hataya: "Detection of hop latent viroid (HLVd) using reverse transcription and polymerade chain reaction (RT-PCR)" Ann.Phytopath.Soc.Japan. 58. 677-684 (1992)
