プロテインキナ-ゼCの特異的分子種発現細胞の構築・応用と選択的制御剤の開発研究

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02557015
• Research Institution: Kobe University, Laboratory of Molecular Biology
• Principal Investigator: 深見 泰夫 神戸大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (00156746)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 橘 秀樹 神戸大学, 理学部, 助教授 (70126118) ; 荻田 浩司 神戸大学, 医学部, 助手 (60204103) ; 吉川 潮 神戸大学, 医学部, 講師 (40150354)
• Keywords: プロテンキナ-ゼC / 蛋白質リン酸化反応 / 生理活性物質 / 情報受容機構 / cDNA / 発現細胞系

Research Abstract

本研究では、プロテインキナ-ゼC(PKC)ファミリ-に焦点をあて、以下の諸点の試験的解析を行なうことを目的とした。1.PKCの分子種特異的活性調節物質の開発。2.分子種特異的活性調節物質のPKCの特異的分子種発現細胞への応用。3.上記細胞系を用いた受容応答機構の解析。
これらの解析を行なうには、PKC各分子種の分離・精製が必須である。今年度は、これまでにcDNAがクロ-ニングされているPKC分子種の内、まだ組織からの分離に成功していない2つの分子種(δ,ε)について、酵素の分離・精製と分離された酵素の諸性質の解析を行なった。材料としてはラットの脳を用い、対照としてδ,εそれぞれのcDNAをCOS-7細胞に導入し発現させたものを用いた。また、酵素蛋白質の同定のため、それぞれの分子種に特異的な坑ペプチド抗体を作成した。その結果、これら2種のPKCを分離・同定すると共に、種々の活性調節物質による活性化のパタ-ンの違い、基質特異性の違い、蛋白質の組織分布の違い、等を明かにすることができた。さらに、各PKC分子種を介した受容応答機構の解析に向けて今年度は、アフリカツメガエル卵母細胞からもPKC分子種を単離し、その性質の解析を行なった。卵母細胞の系は、細胞分裂・細胞周期の制御においてPKCの関与がある程度明かになっている系であるが、これまでに酵素の単離がなされていなかったものである。今後この系は、昨年度解析した酵母の系と並んで情報受容応答機構の解析と、細胞分裂・細胞周期の制御におけるPKCの役割の解明に役立っていくものと思われる。

Research Products

• [Publications] Sahara,S.,Sato,K.I.,Aoto,M.,Ohnishi,T.,Kaise,H.,Koide,H.,Ogita,K.,and Fukami,Y.: "Characterization of protein kinase C in Xenopus oocytes." Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 105-114 (1992)
• [Publications] Ogita,K.,Miyamoto,S.,Yamaguchi,K.,Koide,H.,Fujisawa,N.,Kikkawa,U.,Sahara,S.,Fukami,Y.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of δ-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)
• [Publications] Koide,H.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of ε-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)
• [Publications] Nishizuka,Y.,Shearman,M.S.,Oda,T.,Shinomura,T.,Berry,N.,Asaoka,Y.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,Kishimoto,A.,Kose,A.,Saito,N.,and Tanaka,C.: "Progress in Brain Research" Elsevier(Amsterdam), 7 (1991)
• [Publications] Ogita,K.,Ono,Y.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 7 (1991)
• [Publications] Kishimoto,A.,Saito,N.,and Ogita,K.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 8 (1991)
• [Publications] Fukami,Y.and Nishizuka,Y.: "Adenine Nucleotides in Cellular Energy Transfer and Signal Transduction" Birkhauser Verlag(Basel), (1992)