1990 Fiscal Year Annual Research Report
血液・凝固亢進状態の早期診断を目的とした新規診断薬の開発とその臨床応用
| Project/Area Number |
02557114
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokushima |
|---|
Principal Investigator |
鈴木 宏治 徳島大学, 酵素科学研究センター, 教授 (70077808)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桑田 学 エーザイ株式会社, 研究開発本部, 研究員
吉武 新次 エーザイ株式会社, 研究開発本部, 主任研究員
楢木 徹 エーザイ株式会社, 研究開発本部, 主任研究員
|
|---|
| Keywords | 活性化プロテインC / プロテインCインヒビタ- / α_1アンチトリプシン / APC・PCI複合体 / APC・α_1AT複合体 / DIC / 血管内凝固前状態 |
|---|
| Research Abstract |
プロテインCは,血液凝固制御プロテア-ゼ前駆体である。微小血管内で生成されたトロンビンは,フィブリン形成や血小板の活性化よりも早く内皮細胞上のトロンボモジュリンに結合し,ブロテインCを特異的に活性化する。活性化プロテインC(APC)は、凝固第Va因子および第VIII^a因子を選択的に失活化し凝固反応を阻害する。地方APCは、血漿中のプロテインCインヒビタ-(PCI)およびα_1アンチトリプシン(α_1AT)と複合体を形成して血液中から排除される。これまでの申請者らの予備検討で,APC・PCI複合体およびAPC・α_1AT複合体を測定し,両複合体が各種静脈血栓症やDIC患者で,既知のフィブリノペプチドAや可溶性フィブリンモノマ-複合体などの血管内凝固分子マ-カ-と異なり,疾病の発症前早期から特異的に高値を示すことを見出し報告してきた。本研究は、血管内凝固前状態分子マ-カ-としてのAPC・PCI複合体およびAPC・α_1AT複合体の特異的かつ高感度免疫学的測定法を開発し,その臨床応用を実施することを目的とする。本年度の研究で,申請者らは,APC,PCIおよびα_1ATに対するモノクロ-ン抗体を作成した。これらの抗体の中からAPC・PCI複合体のみならびにAPC・α_1AT複合体のみと反応する抗体を固相ELISAを用いて検索し,2種類のAPC・PCI複合体と反応する抗体を得た。現在,これらの抗体を用いてサンドイッチELISAを開発中である。一方,APCに対する抗体およびPCIに対する抗体を用いてサンドイッチELISAを開発し,静脈血栓症患者およびDIC患者の血漿中の複合体濃度を測定した。その結果,両患者の多くでAPC・PCI複合体値が高まっていることを確認した。現在,このELISAを用いて,日本ザルに惹起した実験的DICにおける時間経過に伴う複合体の変動を検討中である。
|
-
[Publications] Nishioka Junji & Suzuki,Koji: "Inhibition of cofactor activity of protein S by a complex of protein S and C4bーbinding protein:Evidence for an inactive ternary complex formation between protein S,C4bーbinding protein and activated protein C." J.Biol.Chem.265. 9072-9076 (1990)
-
[Publications] Sejima,H.,Hayashi,T.Deyashiki,F.,Nishioka,J.& Suzuki,K.: "Primary structure of vitamin Kーdependent protein Z." Biochem.Biophys.Res.Commun.171. 661-668 (1990)
-
[Publications] Suzuki,K.,Nishioka,J.& Hayashi,T.: "Localization of thrombomodulinーbinding site within human thrombin." J.Biol.Chem.265. 13263-13267 (1990)
-
[Publications] Hayashi,T.& Suzuki,K.: "Monoclonal antibodies for thrombomodulin which recognize binding sites for thrombin and protein C." J.Biochem.108. 874-878 (1990)
-
[Publications] Hayashi,T.,Zushi,M.,Yamamoto,S.& Suzuki,K.: "Further localization of binding sites for thrombin and protein C in human thrombomodulin." J.Biol.Chem.265. 20156-20159 (1990)
-
[Publications] Kodamaa,S.,Uchijima,E.,Nagai,M.,Mikawatani,K.,Hayashi,T.& Suzuki,K.: "Oneーstep enzyme immunoassay for soluble human thrombomodulin using monoclonal antibodies." Clin.Chim.Acta. 192. 191-200 (1990)
