1991 Fiscal Year Annual Research Report
血液凝固亢進状態の早期診断を目的とした新規診断薬の開発とその臨床応用
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02557114
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
鈴木 宏治 三重大学, 医学部, 教授 (70077808)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桑田 学 エーザイ株式会社, 研究開発本部, 研究員
吉武 新次 エーザイ株式会社, 研究開発本部, 主任研究員
楢木 徹 エーザイ株式会社, 診断薬部研究室, 主任研究員
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| Keywords | 活性化プロテインC / プロテインCインヒビタ- / α_1アンチトリプシン / APC・PC1複合体 / APC・α_1AT複合体 / DIC / 血管内凝固前状態 / 血栓性分子マ-カ- |
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| Research Abstract |
プロテインCは、血液凝固制御プロテア-ゼ前駆体である。微小血管内で生成されたトロンビンは、フィブリン形成や血小板の活性化よりも早く内皮細胞上のトロンボモジュリンに結合し、プロテインCを特異的に活性化する。活性化プロテインC(APC)は、凝固第Va因子および第VIIIa因子を選択的に失活化し、凝固反応を阻害する。他方APCは、血漿中のプロテインCインヒビタ-(PC1)およびα_1アンチトリプシン(α_1AT)と複合体を形成して血液中から排除される。昨年までの申請者らの検討で、APC・PCI複合体およびAPC・α_1AT複合体は、各種静脈血栓症やDIC患者で、既知のフィブリノペプチドAや可溶性フィブリンモノマ-複合体などの血管内凝固分子マ-カ-と異なり、疾病の発症前早期から特異的に高値を示すことが明らかにされてきた。本研究は、血管内凝固前状態分子マ-カ-としてのAPC・PCI複合体およびAPC・α_1AT複合体の特異的かつ高感度免疫学的測定法を開発し、その臨床応用を実施することを目的とするものである。本年度は昨年度に引き続き、APC、PCIおよびα_1ATに対するモノクロ-ン抗体の中からAPC・PC1複合体ならびにAPC・α_1AT複合体とのみ反応する抗体を固相ELISAを用いて検索した。その結果、2種類のAPC・PCI複合体と反応する抗体を得、現在この抗体を用いて高感度・高精度の電気化学発光免疫測定法を開発中である。他方、従来のサンドイッチELISAを用いて各種静脈血栓症患者およびDIC患者の血漿中の複合体濃度を測定し、両患者の多くでAPC・PCI複合体値が特異的に高値をとることを認めた。また、このELISAを用いて、日本ザルに惹起した実験的DICにおいて、APC・PCI複合体が発症早期に特異的に増加することを認め、その有用性を一層確認できた。
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[Publications] Suzuki,K.,Nishioka,J.& Hayashi,T.: "Localization of thrombomodulin-binding site within human thrombin." J.Biol.Chem.265. 13263-13267 (1990)
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[Publications] Hayashi,T.& Suzuki,K.: "Monoclonal antibodies for thrombomodulin which recognize binding sites for thrombin and protein C." J.Biochem.108. 874-878 (1990)
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[Publications] Hayashi,T.,Zushi,M.,Yamamoto,S.& Suzuki,K.: "Further localization of binding sites for thrombin and Protein C in human thrombomodulin." J.Biol Chem.265. 20156-20159 (1990)
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[Publications] Kodama,S.,Uchijima,E.,Nagai,M.,Mikawatani,K.,Hayashi,T.& Suzuki,K.: "One-step sandwich enzyme immunoassay for soluble human thrombomodulin using monoclonal antibodies." Clin.Chim.Acta. 192. 191-200 (1990)
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[Publications] Suzuki,K.& Nishioka,J.: "A thrombin-based peptide corresponding to the sequence of the thrombomodulin-binding site blocks the procoagulant activities of thrombin." J.Biol.Chem.266. 18498-18501 (1991)
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[Publications] Zushi, M., Gomi, K., Honda, G., Kondo, S., Yamamoto, S., Hayashi, T. & Suzuki, K.: "The Asp 349 in the fourth EGF-like structure of human thrombomodulin plays a role in its Ca^<2+>-mediated binding to protein C." J.Biol.Chem. 266. 19886-19889 (1991)
