1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血幹細胞へ高頻度に遺伝子を導入する方法の開発

Research Project

Project/Area Number	02558010
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	桂義元京都大学, 胸部疾患研究所, 教授 (90027095)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	勅使河原計介京都大学, 胸部疾患研究所, 助手 (50217402)
Keywords	遺伝子導入 / レトロウイルスベクタ- / 骨髄 / 幹細胞 / 遺伝子治療
Research Abstract	遺伝子治療の基礎研究として,造血幹細胞へ効率よく遺伝子導入を行う方法の開発を目的として研究を行った.具体的には,(1)レトロウイルスベクタ-を高率に産生する方法と,(2)そのウイルスベクタ-をマウスの骨髄幹細胞へ高率に感染させる方法を開発することである.(1)に関しては,まずベクタ-の改良を行った.多くのレトロウイルスベクタ-ではプロモ-タ-としてモロニ-白血病ウイルスのLTRが用いられているために幹細胞での発現能がほとんどない.本研究ではこのエンハンサ-部分をミュ-タントポリオ-マウイルスのエンハンサ-と交換することにより,幹細胞で発現するベクタ-の作成に成功した.次に,高率にウイルス産生を行うパッケ-ジング細胞を選択した.第1年度まではPA317細胞を用いていたが,この細胞では5x10^6CFU/mlが限度であった.GPE86細胞では3X10^6CFU/mlであったので,この細胞からサブクロ-ン選択し,3x10^7CFU/mlのウイルス産生を行うM3細胞を得た.骨髄細胞ヘレトロウイルスベクタ-を高率に感染させる方法として,トランスウエル法を用いた.骨髄細胞の培養はストロ-マ細胞株へneo遺伝子を導入したPA6-neoとの共培養,さらにこの系へ種々のサイトカインを加える方法を用いた.最良の方法はPA6-neoとIL-1,3,6またはIL-1,3,6とSCFの組合せであった.これらの培養ヘトランスウエル法でウイルス感染を行ったものを放射線照射を行ったマウスへ静注し,8日目または12日目の脾臓細胞ではIL-1,3,6とSCFを加えた群でneo遺伝子の存在が証明された.また,骨髄培養法としてDexter法を用いた場合も,同様に脾臓中にneo遺伝子の存在が証明された.すなわち,本研究の目的である造血幹細胞へ高率に遺伝子を導入する方法は,満足できるところまで確立された.本研究の成果はヒト骨髄幹細胞へ高率に遺伝子導入を行うための基礎となるものである.

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] T.Kina: "Identification of a 107KDa glycoprotein that mediates adhesion between stromal cells and hematolymphoid cells." The Journal of Experimental Medicine. 173. 373-381 (1991)
[Publications] O.Mazda: "Requirement of dendritic cells and B cells in the clonal deletion Mls-reactive T cells in the thymus." The Journal of Experimental Medicine. 173. 539-547 (1991)
[Publications] J.Gyotoku: "Inhibition of human immunodeficiency virus replication in a human T cell line by antisense RNA expressed in the cell." Virus Genes. 5. 189-202 (1991)
[Publications] K.Iwai: "Qualitative difference of anti-DNA antibody-producing cell precursors in the preimmune B cell repertoire between normal and lupus-prone mice." Clinical and Experimental Immunology. 86. 106-111 (1991)
[Publications] S.Ideyama: "Intrathymic induction of neonatal tolerance to Mls-1a determinant:Clonal deletion and clonal anergy by hematolymphoid cells." Immunology. 74. 240-245 (1991)
[Publications] Y.Watanabe: "Interleukin 7 preferentially supports the growth of γδ д cell receptor-bearing T cells from fetal thymocytes in vitro." International Immunology. 3. 1067-1075 (1991)
[Publications] 桂義元: "岩波講座-分子生物科学11生命体のまもり方" 岩波書店, 182 (1991)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血幹細胞へ高頻度に遺伝子を導入する方法の開発

Principal Investigator

桂 義元 京都大学, 胸部疾患研究所, 教授 (90027095)

Research Products

[Publications] T.Kina: "Identification of a 107KDa glycoprotein that mediates adhesion between stromal cells and hematolymphoid cells." The Journal of Experimental Medicine. 173. 373-381 (1991)

[Publications] O.Mazda: "Requirement of dendritic cells and B cells in the clonal deletion Mls-reactive T cells in the thymus." The Journal of Experimental Medicine. 173. 539-547 (1991)

[Publications] J.Gyotoku: "Inhibition of human immunodeficiency virus replication in a human T cell line by antisense RNA expressed in the cell." Virus Genes. 5. 189-202 (1991)

[Publications] K.Iwai: "Qualitative difference of anti-DNA antibody-producing cell precursors in the preimmune B cell repertoire between normal and lupus-prone mice." Clinical and Experimental Immunology. 86. 106-111 (1991)

[Publications] S.Ideyama: "Intrathymic induction of neonatal tolerance to Mls-1a determinant:Clonal deletion and clonal anergy by hematolymphoid cells." Immunology. 74. 240-245 (1991)

[Publications] Y.Watanabe: "Interleukin 7 preferentially supports the growth of γδ д cell receptor-bearing T cells from fetal thymocytes in vitro." International Immunology. 3. 1067-1075 (1991)

[Publications] 桂 義元: "岩波講座-分子生物科学11生命体のまもり方" 岩波書店, 182 (1991)

桂義元京都大学, 胸部疾患研究所, 教授 (90027095)

[Publications] 桂義元: "岩波講座-分子生物科学11生命体のまもり方" 岩波書店, 182 (1991)