1990 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト血小板からの軟骨・骨細胞増殖因子の精製とその性質

Research Project

Project/Area Number	02558019
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	加藤幸夫大阪大学, 歯学部, 助教授 (10112062)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	浅田彬大阪大学, 歯学部, 講師 (50028734)
Keywords	血小板 / 軟骨細胞 / プロテオグリサン合成 / 成長因子 / 骨折
Research Abstract	骨折部では、軟骨細胞の分化と増殖が著しく亢進してさらに軟骨が石灰化した後、新生骨に置き代わり骨が修復する。骨折部位に抗凝固剤を投与したり血ぺいを除去すると治癒が遅れることからこの過程で血小板因子が重要であることが古くから示唆されている。しかしその物質的基盤はいまだ不明である。最近申請者らは、ヒト血小板の抽出物を軟骨細胞培養系に添加すると、軟骨細胞の増殖と基質産生が亢進することを見いだした。そこで本年度は、これらの成長因子の効率良い精製法を開発する。「結果」 1,ト-ソ-社製TSK2000SWの他、島津社製、ファルマシア製の各種の分子ふるいクロマトグラフィ-用のHPLCカラムを用いて各種の溶媒(PBS,PBS+1M NaCl,酢酸アンモニウム)で血小板由来因子の精製を試みたがいずれも活性を損失した。(さらに検討中。) 2,逆相C18クロマトグラフィ-での三種類の溶媒(アセトニトリル,アセトニトリル+イソプロパノ-ル,イソプロパノ-ルのみ)を検討した結果、0.1%TFA+イソプロパノ-ルのみが活性の維持に良いことが判明した。 3,血小板抽出物中のTGFーbetaとFGFの含量を測定した(それぞれ10および1ng/0.1mg soluble protein)が、これらの成長因子では、血小板中に存在する強力な軟骨細胞増殖活性を説明することができなかった。 (現在、研究を続行している。)

Research Products
(10 results)

All Other

All Publications (10 results)

[Publications] Tatsuya Koike et al.: "Potent Mitogenic Effects of Parathyroid Hormone(PTH) on Embryonic Chick and Rabbit Chondrocytes" J.Clin.Invest.85. 626-631 (1990)
[Publications] Katsuhiko Sato et al: "1α,25ーDihydroxyvitamin D_3 Stimulates Colony Formation of Chick Embryo Chondrocytes in soft Agar" Exp.Cell Res.187. 335-338 (1990)
[Publications] Yukio Kato et al.: "Effects of Parathyroid Hormore and Calcification on Alkaline Phosphatase Activity and Matrix Calcification in Rabbit GrowthーPlate Chondrocyte Cultures" Endocrinology. 127. 114-118 (1990)
[Publications] Hiroyuki Inoue et al: "Stimulation of Proteoglycan and DNA Synthesis in Chondrocytes by Centrifugation" J.Dental Res.69. 1560-1563 (1990)
[Publications] Yukio Kato et al.: "Fibroblast growth factor is an inhibitor of chondrocyte terminal differentiation" J.Biol.Chem.265. 5903-5909 (1990)
[Publications] Weiqun Yan et al.: "Stimulation by Con canavalin A of Cartilage matrix proteoglycan synthesis in chondrocyte cultures" J.Biol.Chem.265. 10125-10131 (1990)
[Publications] Yukio Kato et al.: "Role of 1,25ーdihydroxychole calciferol in growthーplate cartilage:inhibition of terminal differentiation of chondrocytes in vitro and in vivo." Proc.Natl.Acad.su.U.S.A.87. 6522-6526 (1990)
[Publications] Masahiro Iwamoto et al: "Reduction in basic fibroblast growth factor recepter is coupled with terminal differentiation of chondrocytes." J.Biol.Chem.266. 461-467 (1991)
[Publications] 中島和久ら: "血小板に存在する軟骨細胞増殖因子iの精製(日本骨代謝学会奨励賞)" 日本骨代謝学会誌. 8. 255-261 (1990)
[Publications] 島津篤ら: "軟骨細胞培養系における副甲状腺ホルモンによるインスリン様成長因子の産生促進" 日本骨代謝学会誌. 9. 37-42 (1991)

1990 Fiscal Year Annual Research Report

ヒト血小板からの軟骨・骨細胞増殖因子の精製とその性質

Principal Investigator

加藤 幸夫 大阪大学, 歯学部, 助教授 (10112062)

Research Products

[Publications] Tatsuya Koike et al.: "Potent Mitogenic Effects of Parathyroid Hormone(PTH) on Embryonic Chick and Rabbit Chondrocytes" J.Clin.Invest.85. 626-631 (1990)

[Publications] Katsuhiko Sato et al: "1α,25ーDihydroxyvitamin D_3 Stimulates Colony Formation of Chick Embryo Chondrocytes in soft Agar" Exp.Cell Res.187. 335-338 (1990)

[Publications] Yukio Kato et al.: "Effects of Parathyroid Hormore and Calcification on Alkaline Phosphatase Activity and Matrix Calcification in Rabbit GrowthーPlate Chondrocyte Cultures" Endocrinology. 127. 114-118 (1990)

[Publications] Hiroyuki Inoue et al: "Stimulation of Proteoglycan and DNA Synthesis in Chondrocytes by Centrifugation" J.Dental Res.69. 1560-1563 (1990)

[Publications] Yukio Kato et al.: "Fibroblast growth factor is an inhibitor of chondrocyte terminal differentiation" J.Biol.Chem.265. 5903-5909 (1990)

[Publications] Weiqun Yan et al.: "Stimulation by Con canavalin A of Cartilage matrix proteoglycan synthesis in chondrocyte cultures" J.Biol.Chem.265. 10125-10131 (1990)

[Publications] Yukio Kato et al.: "Role of 1,25ーdihydroxychole calciferol in growthーplate cartilage:inhibition of terminal differentiation of chondrocytes in vitro and in vivo." Proc.Natl.Acad.su.U.S.A.87. 6522-6526 (1990)

[Publications] Masahiro Iwamoto et al: "Reduction in basic fibroblast growth factor recepter is coupled with terminal differentiation of chondrocytes." J.Biol.Chem.266. 461-467 (1991)

[Publications] 中島 和久ら: "血小板に存在する軟骨細胞増殖因子iの精製(日本骨代謝学会奨励賞)" 日本骨代謝学会誌. 8. 255-261 (1990)

[Publications] 島津 篤ら: "軟骨細胞培養系における副甲状腺ホルモンによるインスリン様成長因子の産生促進" 日本骨代謝学会誌. 9. 37-42 (1991)

加藤幸夫大阪大学, 歯学部, 助教授 (10112062)

[Publications] 中島和久ら: "血小板に存在する軟骨細胞増殖因子iの精製(日本骨代謝学会奨励賞)" 日本骨代謝学会誌. 8. 255-261 (1990)

[Publications] 島津篤ら: "軟骨細胞培養系における副甲状腺ホルモンによるインスリン様成長因子の産生促進" 日本骨代謝学会誌. 9. 37-42 (1991)