ダイズにおけるピリミジンダイマ-の光回復酵素遺伝子のクロ-ニングと構造解析

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02660005
• Research Institution: Kagawa University
• Principal Investigator: 池田 滋 香川大学, 農学部, 助手 (90151290)
• Keywords: ダイズ / 光回復酵素 / 遺伝子 / クロ-ニング

Research Abstract

1.光回復能を有するダイズ品種の緑葉より全RNAを抽出し,オリゴdTセルロ-スカラムによりpoly(A)^+RNAを調整した.それを鋳型にcDNAを合成し,常法にしたがってλZAPファ-ジベクタ-にパッケ-ジングしてcDNAライブラリ-を作製した.同様に,イネ培養細胞およびソラマメからもcDNAライブラリ-を作製した.
2.酵母DNAよりPCR法により増幅した光回復酵素遺伝子をECL標識しプラ-クハイブリダイゼ-ションを行った.50万のプラ-クから45個のポジティブプラ-クをスクリ-ニングした.各プラ-クのDNAをプラスミドにつないで光回復能欠損酵母の形質転換を行っているところである.
3.光回復能を有するダイズ品種の緑葉からの粗抽出液を硫安沈殿したところ,光回復酵素活性は約10倍に高められた.さらにSephadexGー100およびリン酸カルシウムゲルによる精製を行ったところ,精製ファクタ-はそれぞれ約30および300倍に高められた.精製過程の各分画の光回復酵素活性は,光回復能を欠くインフルエンザ菌(ストレプトマイシ感受性)のストレプトマイシン抵抗性への形質転換頻度の測定により定量した.さらにイオン交換クロマトグラフィ-による精製を進める必要がある.
4.イネおよびソラマメのcDNAに対して,先述のプライマ-を用いたPCR法を適用したところ,長さは異なるが,いずれも酵母光回復酵素遺伝子と相同性の高いDNA断片が増幅された.また,同様のPCR分析を光回復能の異なるダイズ品種のcDNAに対して行ったところ,光回復能の高い品種と低い品種の間でPCR産物に明瞭な差異が認められた.

Research Products

• [Publications] 池田 滋: "種子γ線感受性の異なるダイズ品種のピリミジンダイマ-修復能" 育種学雑誌. 39別2. 388-389 (1989)
• [Publications] 池田 滋: "種子γ線感受性の異なるダイズ品種の培養細胞におけるUV感受性" 育種学雑誌. 38別2. 296-297 (1988)
• [Publications] 池田 滋: "イネ懸濁培養細胞におけるUV感受性とピリミジンダイマ-修復能" 育種学雑誌. 41別1. 386-387 (1990)
• [Publications] 池田 滋: "イネにおける紫外線誘発損傷の選択的DNA修復" 育種学雑誌. 41別2. 370-371 (1991)