細胞質特異性を有する核遺伝子の単離とその機能に関する分子生物学的研究

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02660007
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 村田 稔 岡山大学, 資源生物科学研究所, 助教授 (20166292)
• Keywords: 核・細胞質相互作用 / ゲノミック・サブトラクション法 / コムギ / 染色体特異的塩基配列 / Midget染色体 / ライムギ

Research Abstract

1.研究の目的と計画:ライムギ細胞質を有する六倍性コムギChinese Spring(CS)((cereale)ーCSと略す)には,ライムギ由来と考えられる非常に小型の染色体ー“Mideget"と呼ばれるーが1個または1対存在する。この染色体には,ライムギの細胞質と相互に作用し,細胞質の機能を維持するなんらかの遺伝子が存在することが考えられている。本研究では,このmidget染色体の構造・機能を及びその特異的遺伝子を調べるために,ゲノミック・サブトラクション法によるmiget染色体特異的DNAのクロ-ニングを行った。
2.研究結果:Mbo Iを用いたゲノミック・サブトラクション・ライブラリ-を作製し,158のクロ-ンについて調べた結果,16のクロ-ンに400bp以上の挿入断片が認められた。サザン,ドット・ブロット・ハイブリダイゼイション法で調べたところ,そのうちの13個は,すべて同じ反復配列であった。しかし,残りの3クロ-ンはライムギ,(cereale)ーCSのDNAと特異的にハイブリダイズすることが示された。クロ-ン化された断片は,それぞれ異なったサイズ,制限酵素認識部位をもっており,その起源を異にしていると考えられた。これらの由来を検定するために,挿入断片をプロ-ブとし,コムギのライムギ染色体添加系統(コムギにライムギの特定染色体を一対添加した7系統)から抽出したDNAに対してドット・ブロット・ハイブリダイゼイションを行った。その結果,ひとつのクロ-ンは,ライムギの5R染色体由来,もうひとつのクロ-ンは,ライムギ染色体のほとんどに共通な塩基配列であった。最後のクロ-ンは,ライムギの葉緑体DNA由来であったが,特定遺伝子をコ-ドしていることがわかっている。先の2つのクロ-ン化配列については,染色体構造を維持するなんらかの働きをもっていること可能性が示唆されている。

Research Products

• [Publications] 村田 稔: "ライムギmidget染色体遺伝子の解析.II.クロ-ニングされたライムギ特異的塩基配列の起源について" 育種学雑誌. 40(別1). 426-427 (1990)
• [Publications] 村田 稔: "植物における染色体特異的DNAのクロ-ニング" 細胞. 23. 7-10 (1991)
• [Publications] 村田 稔: "ライムギmidget染色体遺伝子の解析.III.In situハイブリダイゼイションによる解析" 育種学雑誌. 41(別1). (1991)