1991 Fiscal Year Annual Research Report

細菌が生産するペプスタチン非感受性カルボキシル・プロテア-ゼの構造と機能

Research Project

Project/Area Number	02660124
Research Institution	College of Agriculture, University of Osaka Prefecture
Principal Investigator	小田耕平大阪府立大学, 農学部, 助教授 (50081584)
Keywords	酸性プロテア-ゼ / カルボキシルプロテア-ゼ / アスパルティックプロテア-ゼ / ペプスタチン非感受性 / SーPI非感受性 / Scytalidiumタイプ / ペプシンタイプ / 構造と機能
Research Abstract	カルボキシルプロテア-ゼ(CP)は,ペプスタチン感受性CP(ペプシンなどの既報のCP)とペプスタチン非感受どCPの2群に大別される。前者のCPは酵素学的性質が良く類似し,一次構造,高次構造も相同性が高い。後者のCPは,著者らが発見したものであり,前者に比べ,基質特異性や一次構造も,かなり異なる。従って,このPC群は前者のCPとは別の系統を辿って進化したものと予想される。このような特徴をもつペプチスタチン非感受性CPの構造と機能を解明する研究の一環としてPseudomonas sp、No、101CPに的を絞り,検討を加えた。尚,このCPは、原核生物より得られた最初のCPであ,化学的に決定された一次構造は既報のいずれのCPとも相同構造がなく,CPの触媒残基アミノ酸配列であるD^TG(D^:触媒残基)配列もない極めてユニ-クなCPである。 1.触媒残基の同定この目的の為に,著者らの分取したチロスタチン(IsovakrylーTyrーLeuーTyrosinal,Ki=2.5nM)の阻害部位,Tyrosinal側に触媒残基のカルボキシル基と共有結合できるようにエキスポキシ環を付け,そのペプチド骨格の長さを変えた3種類の阻害剤を合成し,その効果を調べた。その結果,ペプチド骨格の最も短いZーTyrーOーCH_2ーCHーCH_2のみが阻害活性を示し,この阻害は拮抗型であることが判明した。 2.遺伝子の解析このCP遺伝子の全塩基配列を決定した。成塾型CPのアミノ酸配列(372残基)は先に化学的に決定したものと一致した。また,このCPは587アミノ酸残基のプレプロ体として生成され,これがプロセッシングを受けて,372アミノ酸残基の成塾型CPとして分泌されることが明らかになった。更に,このプロレプロ部分は,成塾型CPの活性化に必須であることが強く示唆された。以上より,このCPの構造と機能解析の準備がほぼ完了した。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] K.Oda,Y.Fukuda,S.Murao,K.Uchida and M.Kainosho: "A Novel Proteinase Inhibitor,Inhibiting Some Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinases" Agric.Biol.Chem.53. 405-415 (1989)
[Publications] D.Tsuru,A.Naotuka,R.Kobayashi,T.Yoshimoto,K.Oda and S.Murao: "Inaction of Scytalidium lignicolum Acid Proteinase B with 1,2ーepoxyー3ー(4'ーazidoー2'ーnitophenoxy)propane" Aqric.Biol.Chem.53. 2751-2756 (1989)
[Publications] K.Oda,H.Nakatani and B.M.Dunn: "Subsrate Specificity,and Kinetic Properties of Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp.No.101" Biochim.Biophys.Acta.(1992)
[Publications] K.Oda et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase" J.Biochm.(Tokyo).
[Publications] K.Oda et al.: "Cloning and Sequencing of Pepstainーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp.No.101" J.Biochem.(Tokyo).
[Publications] K.Oda et al.: "The Role of Prepro Region of Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas ap.No.101" J.Biochem.(Tokyo).
[Publications] Y.Yoshinaka,Y.Kato and K.Oda: "Retroviral Protease Maturation and Morphogenesis(ed.by L.H.Pearl)“Retrovira Protease:Substrate Specifictty and Inhibitors"" Stockton Press,N.Y., 9 (1990)
[Publications] K.Oda and S.Murao: "The Aspartic Proteinases:Genetic,Structures and Mechanisms(ed.by B.M.Dunn)“Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinases"" Plenum Publishing Corporation,N.Y., 7 (1992)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

細菌が生産するペプスタチン非感受性カルボキシル・プロテア-ゼの構造と機能

Principal Investigator

小田 耕平 大阪府立大学, 農学部, 助教授 (50081584)

Research Products

[Publications] K.Oda,Y.Fukuda,S.Murao,K.Uchida and M.Kainosho: "A Novel Proteinase Inhibitor,Inhibiting Some Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinases" Agric.Biol.Chem.53. 405-415 (1989)

[Publications] D.Tsuru,A.Naotuka,R.Kobayashi,T.Yoshimoto,K.Oda and S.Murao: "Inaction of Scytalidium lignicolum Acid Proteinase B with 1,2ーepoxyー3ー(4'ーazidoー2'ーnitophenoxy)propane" Aqric.Biol.Chem.53. 2751-2756 (1989)

[Publications] K.Oda,H.Nakatani and B.M.Dunn: "Subsrate Specificity,and Kinetic Properties of Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp.No.101" Biochim.Biophys.Acta.(1992)

[Publications] K.Oda et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase" J.Biochm.(Tokyo).

[Publications] K.Oda et al.: "Cloning and Sequencing of Pepstainーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

[Publications] K.Oda et al.: "The Role of Prepro Region of Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas ap.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

[Publications] Y.Yoshinaka,Y.Kato and K.Oda: "Retroviral Protease Maturation and Morphogenesis(ed.by L.H.Pearl)“Retrovira Protease:Substrate Specifictty and Inhibitors"" Stockton Press,N.Y., 9 (1990)

[Publications] K.Oda and S.Murao: "The Aspartic Proteinases:Genetic,Structures and Mechanisms(ed.by B.M.Dunn)“Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinases"" Plenum Publishing Corporation,N.Y., 7 (1992)

小田耕平大阪府立大学, 農学部, 助教授 (50081584)