1991 Fiscal Year Annual Research Report

凍結超薄切片法を用いたホルモンの細胞内プロセッシングの免疫電子顕微鏡的解析

Research Project

Project/Area Number	02670004
Research Institution	Gunma University
Principal Investigator	田中滋康群馬大学, 内分泌研究所, 助手 (90146233)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	黒住一昌群馬大学, 内分泌研究所, 教授 (20008593)
Keywords	下垂体 / プロオピオメラノコルチン細胞 / 免疫細胞化学 / プロセシング / 凍結超薄切片法 / 金コロイド法 / 合成ペプチド
Research Abstract	下垂体前葉ACTH細胞におけるプロオピオメラノコルチン(POMC)のプロセシングのおこる部位として,transーGolgi networkおよび分泌果粒が考えられて来たが,まだ充分な考えが得られていない。われわれは前駆体POMCに特異的な抗体(STー1)とACTH(1ー39)に対する抗体を用いて,免疫細胞化学的にこの問題を解析して来た。しかし,ACTH(1ー39)抗体はPOMCも認識するので,プロセシングが細胞内のどの部位から始るのかについては,充分解明されていなかった。そこで,ACTH細胞で産生されるアミド化joining peptide(JP)フラグメント((C)PEPSPREーNH_2)に対する抗体を作製し,この抗体とSTー1抗体の染色性を比較することにより,POMCプロセシングの起始と終止の部位を凍結超薄切片を用いて免疫電顕的に検索した。 ^<35>SーmethioninをAtTー20細胞に取り込ませて,免疫沈降法により,これらの抗体の特異性を検討した結果,JPーNH_2抗体はPOMCを認識せず,プロセスされたフラグメントである16KーpeptideとJPを認識することが判った。凍結超薄切片上では,ACTH細胞には小型で暗調な分泌果粒と大型でやや明調の分泌果粒の2種類が明確に識別された。二重標識金コロイド法において,POMCは前者に,JPーNH_2は後者に標識された。ゴルジ装置の槽内や槽の末端に濃縮された物質は,POMCで標識されたが,JPーNH_2抗体では標識されなかった。これらの結果はプロセシングが分泌果粒で起こることを強く示唆している。また,前葉では胎生期には殆ど全てのACTH細胞がαーMSH免疫陽性を示し,ACTHはαーMSHまで切断されることを示唆するが,生後にαーMSH陽性細胞は激減するので,前葉のACTH細胞では個体発生にともないACTHからαーMSHとCLIPを生成するためのプロセシング酸素が作られなくなるのか,酵素の作用が発現しなくなる可能性が考えられる。今後,プロセシング酵素の発現や活性化機構,細胞内局在を明らかにすることが重要な課題である。

Research Products
(6 results)

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All Publications (6 results)

[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Intracellular sites of proteolytio processing of proーopiomelanocortin in melanotrophs and corticotrophs in the rat pituitary." J.Histochem.Cytochem.39. 809-821 (1991)
[Publications] Shigeyasu Tanaka: "A certain step of proteolytic processing of proopiomelanocortin occurs during the transition between two distinct stages of secretory granules maturation in rat anterior pituitary corticotrophs." Endocrinology.
[Publications] Koichi Ishikawa: "Proーopiomelanocortin(POMC)ーcontaining neurons in rat median eminence." Neuroendocrinology.
[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Proteolytic processing of POMC(proーopiomelanocortin)occurs also in the secretory granules in the rat anterior pituitary corticotrophs." Zool.Sci.8. 1185 (1991)
[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Intracellular site where the processing of proーopiomelanocortin(POMC)occurs in the rat pituitary corticotrophs." Cell Struct.Funct.16. 614 (1991)
[Publications] 田中滋康: "ラット下垂体前葉及び中間部の個体発生におけるPOMC細胞のプロセッシング過程の変換" 解剖学雑誌. 66. 362 (1991)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

凍結超薄切片法を用いたホルモンの細胞内プロセッシングの免疫電子顕微鏡的解析

Principal Investigator

田中 滋康 群馬大学, 内分泌研究所, 助手 (90146233)

Research Products

[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Intracellular sites of proteolytio processing of proーopiomelanocortin in melanotrophs and corticotrophs in the rat pituitary." J.Histochem.Cytochem.39. 809-821 (1991)

[Publications] Shigeyasu Tanaka: "A certain step of proteolytic processing of proopiomelanocortin occurs during the transition between two distinct stages of secretory granules maturation in rat anterior pituitary corticotrophs." Endocrinology.

[Publications] Koichi Ishikawa: "Proーopiomelanocortin(POMC)ーcontaining neurons in rat median eminence." Neuroendocrinology.

[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Proteolytic processing of POMC(proーopiomelanocortin)occurs also in the secretory granules in the rat anterior pituitary corticotrophs." Zool.Sci.8. 1185 (1991)

[Publications] Shigeyasu Tanaka: "Intracellular site where the processing of proーopiomelanocortin(POMC)occurs in the rat pituitary corticotrophs." Cell Struct.Funct.16. 614 (1991)

[Publications] 田中 滋康: "ラット下垂体前葉及び中間部の個体発生におけるPOMC細胞のプロセッシング過程の変換" 解剖学雑誌. 66. 362 (1991)

田中滋康群馬大学, 内分泌研究所, 助手 (90146233)

[Publications] 田中滋康: "ラット下垂体前葉及び中間部の個体発生におけるPOMC細胞のプロセッシング過程の変換" 解剖学雑誌. 66. 362 (1991)