1990 Fiscal Year Annual Research Report

βVLDL受容体の精製およびその構造決定

Research Project

Project/Area Number	02670105
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	村上元庸京都大学, 医学部, 講師 (10157761)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	松本光弘京都大学, 医学部, 助手 (20229579) 長野豊京都大学, 医学部, 助手 (80228048)
Keywords	動脈硬化 / βVLDL / 受容体 / マクロファ-ジ / WHHLウサギ
Research Abstract	本年度はまず、実験の基本的手技として重要な膜蛋白の精製方法を確立する意味で、ウサギのLDL受容体の精製を行なった。正常ウザギの肝細胞のLDL受容体をエストラジオ-ルの投与により誘導し、このウサギの肝臓から膜蛋白分画を超遠心法で分離した。これをDEAEセルロ-スカラムに通し、カラムに吸着した蛋白を溶出させる。得られた蛋白をさらにLDLアフィニティ-カラムを通すことによって精製し、LDL受容体蛋白を得た。これをSDSポリアクリルアミド電気泳動した後ニトロセルロ-スペ-パ-にtransferし、ここにβVLDLをアポEを介してLDL受容体に結合させ、その存在をβVLDL表面に存在する別のアポ蛋白であるアポBに対する抗体を用いて検出した。この結果、LDL受容体蛋白が単一のバンドとして検出され、この手技によって受容体蛋白の精製が可能であることが確認できた。本研究に対する科学研究費で購入した各研究機器は、このような蛋白の分離精製に非常に役立っている。この方法を基本として本研究の目的であるβVLDL受容体蛋白の精製を行ないたいと考えている。具体的にはLDL受容体の欠損したWHHLウサギの、しかも粥状動脈硬化病巣にみられる泡沫細胞の起源であるマクロファ-ジを、受容体精製に用いる細胞とする予定である。現在までに研究の基盤となるWHHLウサギの繁殖は順調に進み、その腹腔マクロファ-ジの採取もすでに確立した方法により安定して行なうことが可能になっている。ただ、βVLDL受容体とLDL受容体の異動については現在議論のあるところであり、WHHLウサギのLDL受容体も完全欠損ではなく、不完全ながらも蛋白として合成されていることが明らかになっており、これらの点に注意を払いつつ今後の実験を進めて行きたいと考えている。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kita,T.,Ishii,K.,Yokode,M.,Kume,N.,Nagano,Y.,Arai,H.& Kawai,C.: "The Role of oxidized low density lipoprotein in the pathogenesis of atherosclerosis." European Heart Journal. 11(supplE). 122-127 (1990)
[Publications] Kita,T.,Yokode,M.,Ishii,k.,Arai,H.& Nagano,Y.: "The role of atherogenic low density lipoproteins (LDL) in the pathogenesis of atherosclerosis." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 188-193 (1990)
[Publications] Kita,T.,Ishii,K.,Yokode,M.,Kume,N.,Nagano,Y.,Arai,H.,Ueda,Y.& Kawai,C.: "Lipoproteins and atherosclerosis." Japanese Circulation Journal. 54. 1226-1232 (1990)
[Publications] Ishii,K.,Kume,N.,Otani,H.,Kawai,C.,Shimano,H.,Yamada,N.& Kita,T.: "Characterization of low density lipoprotein receptors in normal and Watanabe heritable hperlipidemic rabbits." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 496-497 (1990)
[Publications] Kume,N.,Arai,H.,Nagano,Y.,Otani,H.,Ueda,Y.,Kawai,C.,Ishii,K.& Kita,T.: "Receptors for modified low density lipoproteins on human umbilical vein endothelial cells in culture." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 494-495 (1990)
[Publications] Nagano,Y.,Kume,N.,Otani,H.,Arai,H.,Ueda,Y.,Kawai,C.,Ishii,K.& Kita,T.: "Probucol does not act on lipoprotein metabolism of WHHL rabbit's macrophages." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 530-531 (1990)

1990 Fiscal Year Annual Research Report

βVLDL受容体の精製およびその構造決定

Principal Investigator

村上 元庸 京都大学, 医学部, 講師 (10157761)

Research Products

[Publications] Kita,T.,Ishii,K.,Yokode,M.,Kume,N.,Nagano,Y.,Arai,H.& Kawai,C.: "The Role of oxidized low density lipoprotein in the pathogenesis of atherosclerosis." European Heart Journal. 11(supplE). 122-127 (1990)

[Publications] Kita,T.,Yokode,M.,Ishii,k.,Arai,H.& Nagano,Y.: "The role of atherogenic low density lipoproteins (LDL) in the pathogenesis of atherosclerosis." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 188-193 (1990)

[Publications] Kita,T.,Ishii,K.,Yokode,M.,Kume,N.,Nagano,Y.,Arai,H.,Ueda,Y.& Kawai,C.: "Lipoproteins and atherosclerosis." Japanese Circulation Journal. 54. 1226-1232 (1990)

[Publications] Ishii,K.,Kume,N.,Otani,H.,Kawai,C.,Shimano,H.,Yamada,N.& Kita,T.: "Characterization of low density lipoprotein receptors in normal and Watanabe heritable hperlipidemic rabbits." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 496-497 (1990)

[Publications] Kume,N.,Arai,H.,Nagano,Y.,Otani,H.,Ueda,Y.,Kawai,C.,Ishii,K.& Kita,T.: "Receptors for modified low density lipoproteins on human umbilical vein endothelial cells in culture." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 494-495 (1990)

[Publications] Nagano,Y.,Kume,N.,Otani,H.,Arai,H.,Ueda,Y.,Kawai,C.,Ishii,K.& Kita,T.: "Probucol does not act on lipoprotein metabolism of WHHL rabbit's macrophages." Annals of the New York Academy of Sciences. 598. 530-531 (1990)

村上元庸京都大学, 医学部, 講師 (10157761)