プロスタグランジンD_2受容体の生化学的性格付けとクロ-ニング

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670118
• Research Institution: Osaka Bioscience Institute
• Principal Investigator: 伊藤 誠二 大阪バイオサイエンス研究所, 第4研究部, 副部長 (80201325)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 芦高 恵美子 大阪バイオサイエンス研究所, 第4研究部, 研究助手
• Keywords: プロスタグランジンD_2 / cAMP / 非クロマフィン細胞 / 受容体 / クロ-ニング / FRTL5細胞 / EBTr細胞 / 星状細胞

Research Abstract

前年度、非クロマフィン(NC)細胞のmRNAより作製したcDNAライブラリ-をラット甲状腺由来のFRTL5細胞に遺伝子導入を行い、約1,500個の安定したトランスフォ-マットを得たことを報告した。今年度、これらの細胞についてPGD_2による細胞内cAMP濃度の変化について検討した結果、一次スクリ-ニングでは1168細胞株のうち155個の細胞がPGD_2により1.5倍以上のcAMPの上昇が認められた。さらに、二次、三次とスクリ-ニング行った結果、7種類の細胞がPGD_2と反応してcAMPを上昇させたが、中でもA4ー7は再現よくPGD_2と反応し、1.4ー1.8倍程度のcAMPを上昇させた。また、PGD_2受容体のアンタゴニストであるBWA868CやAH6809でPGD_2によるcAMPの抑制が見られたことから、PGD_2受容体遺伝子がこの細胞内で発現していることが示唆された。そこでCOS7細胞とA4ー7細胞を融合させ、クロモゾ-ム外にでたpcD2プラスミドをHirt法で回収し、コンピテント細胞に遺伝子導入し、200コロニ-からプラスミドを抽出した。BamH1とXhoIで切断してインサ-トcDNAのサイズを調べた結果、15種類の異なるcDNAサイズを含むクロ-ンが得られた。これらを再度FRTL5細胞に遺伝子導入し、60時間後にcAMPアッセイを行った結果、PGD_2に反応してcAMPを1.2ー2倍上昇させるクロ-ンが一つ得られ、現在このクロ-ンの塩基配列を解析中である。一方、前年度、PGD_2はcAMPを介して牛胎児気管由来のEBTr細胞のDNA合成、cーmyc遺伝子の発現を抑制することを明らかにしたが、PGD_2がcAMPを介して細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)の上昇を引き起こすこと、逆に他のホルモンの[Ca^<2+>]iの上昇を抑制することを見いだした。また、ラット脳星状細胞ではPGD_2はPGF_<2α>受容体を介して[Ca^<2+>]iを上昇させることを明らかにした。このようにPGD_2の情報伝達機構は多様であり、一日も早くPGD_2受容体遺伝子のクロ-ニングを行い、解明したいと考えている。

Research Products

• [Publications] Seiji Ito: "Type-1 and Type-2 astrocytes are distinct targets for prostaglandins D_2,E_2,and F_<2α>" Glia. (1992)
• [Publications] Kyoko Oda: "Endothelin stimulates both cAMP formation and phosphatidylinositol hydrolysis in cultured embryonic bovine tracheal cells" FEBS Lett. (1992)
• [Publications] Toshiaki Minami: "Allodynia evoked by intrathecal administration of prostaglandin F_<2α> to conscious mice" Pain. (1992)
• [Publications] 伊藤 誠二: "実験医学Vol.8 No14(増刊)" 羊土社, 3 (1990)