1991 Fiscal Year Annual Research Report
トランスジェニックマウスを用いた悪性黒色腫発生機構の解析
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02670164
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
高橋 雅英 名古屋大学, 医学部, 講師 (40183446)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
磯部 健一 名古屋大学, 医学部, 助教授 (20151441)
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| Keywords | ret癌遺伝子 / トランスジェニックマウス / 色素細胞腫瘍 / チロシン燐酸化蛋白 |
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| Research Abstract |
昨年度我々はret癌遺伝子をマウスに導入することにより、色素細胞腫瘍を好発する系を確立したことを報告した。さらにこの腫瘍によりret癌遺伝子を発現する細胞株(以下Melーret)の樹立に成功した。ret癌遣伝子産物はチロシンキナ-ゼ活性を有すると考えられるので,本年度はMelーrat細胞におけるチロシン燐酸化蛋白の解析を行なった。
まず,トランスジェニックマウスに発生した原発腫瘍をMelーret細胞におけるチロシン燐酸化蛋白を抗フォスフォチロシン抗体を用いたウエスタンブロット法にて検索した結果,両者に共通に観察される135kd,125kd,100kdの燐酸化蛋白とMelーret細胞に特異的に存在する85kdの燐酸化蛋白を検出した。このうち100kdのバンドはret蛋白そのものであった。これらの燐酸化蛋白の細胞内局在を調べたところ,135kdと125kdの蛋白は膜画分と細胞質画分に,100kdと85kd蛋白は膜画分のみに存在することが判明した。さらに抗フォスフォチロシン抗体を用いた蛍光抗体法にてMelーret細胞を染色すると細胞膜のみが特異的に染色されることにより,ret蛋白を介したシグナル伝達は細胞膜にて開始されることが強く示唆された。
最近PIー3キナ-ゼの85kdサブユニットが種々のチロシンキナ-ゼの基質蛋白になることが報告されている。よってMelーret細胞に検出された85kdチロシン燐酸化蛋白がPIー3キナ-ゼのサブユニットであるかどうかを知る目的で,Melーret細胞におけるPIキナ-ゼ活性を測定した。しかしながらMelーret細胞におけてPIキナ-ゼ活性の上昇はみられず,85kdの燐酸化蛋白はPIー3キナ-ゼのサブユニットである可能性は少ないと考えられた。
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[Publications] Masahide Takahashi et al.: "Identification of the ret protoーoncogene products in neuroflastoma and leukemia cells." Oncogene. 6. 297-301 (1991)
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[Publications] Takashi Iwamot et al.: "Preferential clevelopment of preーB bymphoma with drastically daonregulated Nーmyc in the Eμーret transgenic mice" European Journal of Immunology. 21. 1809-1814 (1991)
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[Publications] Takashi Iwamot et al: "Aberrant melanogenesis and melanocytic tumon development in thansgenic mice that carry metallotlionein/ret Fusion gene." The EMBO Journal. 10. 3167-3175 (1991)
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[Publications] Masahiko Taniguchi et al.: "The ret qncogene protlucts are memlraneーbound glycoproteins phosphorylated on Tyrosine reeidues in vivo" Biochem.Biophys.Res.Commun. 181. 416-422 (1991)
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[Publications] Masahide Takahashi et al: "Probifertion and neoplastic tramsformation of pigment cells in metallothionein/ret tramsgenic mice" Pigment Cell Reseanch.
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[Publications] Takashi Iwamoto et al.: "The ret oncogene can imduce melanogenesis and melanocyte development in W^v/W^v mice" Experimental Cell Research.
