アデノウイルスEIA遺伝子エンハンサ-配列結合蛋白の構造と機能

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670195
• Research Institution: Sapporo Medical College
• Principal Investigator: 吉田 幸一 札幌医科大学, がん研究所, 講師 (60117653)
• Keywords: アデノウイルス / EIA遺伝子 / エンハンサ- / 転写因子 / cDNAクロ-ニング / cーetsがん遺伝子

Research Abstract

アデノウイルスEIA遺伝子の転写調節領域には数個のエンハンサ-が存在し、EIA自身の転写と他の初期遺伝子の転写調節を行っている。我々はEIAの転写制御機構の解明を目的にHeLa細胞核抽出液からEIAエンハンサ-コア配列(5'A/C GGA A/T GT 3')に結合する蛋白質を同定し、EIAーFと名づけた(Nucleic Acids Res.17,10015,1989)。今回λgtll HeLa細胞cDNAライブラリ-を用い,EIAエンハンサ-コア配列をプロ-ブとしてSouthーWestern法を試みた結果,このプロ-ブに特異的に結合するファ-ジクロ-ンを得た。そしてこのファ-ジクロ-ンが産生するfusion蛋白を用いてゲルシフト法,及びメチル化阻害実験を行ったところ,この蛋白はEIAエンハンサ-コア配列に特異的に結合した。さらにcDNAの塩基配列はets oncogeneファミリ-と非常に高いホモロジ-を示し,その領域はDNA結合に必要なETSドメインに相当した。また,このcDNAをプロ-ブとして用い,ヒト由来細胞株(KB,HeLa,HT1080,MG63)に約2.5KbのmRNAがノ-ザン法で検出された。さらにこのmRNAはアデノウイルス感染により2ー5倍増加した。現在、EIAーF蛋白の全構造を明らかにするためにN末端側の塩基配列を解析中である。またEIAーF cDNAをプロ-ブに用いてヒトの由来のゲノムDNAライブラリ-からEIAーF遺伝子を分離しており,遺伝子の構造についても検討中である。

Research Products

• [Publications] 斉藤 要一: "癌遺伝子によるマウス骨芽細胞株MC3T3ーEIのトランスフォ-メ-ション" 札幌医学雑誌. 60. 233-240 (1991)
• [Publications] 澤田 幸治: "新生化学実験講座2,核酸I分離精製" 東京化学同人, 45 (1991)