コレチストキニン放出ペプチドの精製及びその生理的役割

1991 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670332
• Research Institution: Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
• Principal Investigator: 宮坂 京子 東京都老人総合研究所, 臨床生理部門, 研究員 (90166140)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 般越 顕博 国立病院九州がンセンター, 内科, 医長 (80112340)
• Keywords: コレチストキニン / 膵外分泌 / フィ-ドバックレギュレ-ション / トリプシン / ネット / CCKーRP

Research Abstract

小腸粘膜をSephadex Gー50により分離しHPLCによる精製した結果、生物活性を有する分画はトリプシンインヒビタ-活性を認めず、またPSTIー61とも別の場所に溶出された。そしてその生物活性(膵外分泌刺激作用)は1mg/mlのtrypinで30分間incubateすると消失した。精製した分画をアミノ酸自動分析にかけたが不成功に終ったので、加水分解によりアミノ酸組成を調べたところ63個のアミノ酸がえられた。しかし3次元UVーを検討したところ、240nm付近に最大となることがわかり、ペプチドとしては不可解であるため、さらにHPLCで条件を変えて精製を続行した。その結果、さらに6つのピ-クがえられ、一番大きなピ-ク-つまり240nmで最大となる分画一には生物活性が認められなかった。生物活性を認めた小さなピ-クもまたアミノ酸のsequencingは不成功であり、マスで検討してみたところ、ペプチドではないと判断された。この最後のピ-クは完全なsingle peakにはならず、2峰性となるうえ、溶出パタ-ンに再現性が乏しかったので、またもう一度、最初にsequencingをしたサンプルにもどり、さらに条件をかえてHPLCで精製を行なった。その結果、9つのピ-クがえられ、再現性も高いので、現在このピ-クの活性を検討中である。
現時点では、CCKーRPの完全な精製が終了していない状態なので、前述の部分精製したサンプルを用いてその生物活性を検討した。部分精製CCKーRP2μg/ml/minの生物活性は、2μg/ml/minのPSTIー61の注入時の反応と殆ど同じであった。さらにラット胆汁中の主成分であるタウロコ-ル酸との相互作用を、覚醒ラットを用いて検討したが、いずれも非生理的な高濃度のタウロコ-ル酸が存在すると膵外分泌、CCK分泌刺激作用が弱いか消失した。

Research Products

• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Inhibitory effect of pancreastatin on pancreatic exocrine secretion:pancreastatin inhibits central vagal nerve stimulation." Gastroenterology. 99. 1751-1756 (1990)
• [Publications] Kayoko Tateishi: "Pancreastatin-like immunoreactivity in urine." J Clin Endo Metab. 71. 842-845 (1990)
• [Publications] Hirokazu Tamamura: "Isolation and chracterization of a tumor derived human chromogranin A-related protein and its in vitro conversion to human pancreastatin-48" Eur J Biochem. 191. 33-39 (1990)
• [Publications] 宮坂 京子: "腸膵相関:とくに膵液分泌のコントロ-ルについて" 胆と膵. 11. 687-692 (1990)
• [Publications] Atsuo Jimi: "Tubular complex in the pancreatic tissue after pancreatic duct ligation in rats" J Clin Electron Microscopy. 23. 5-6 (1990)
• [Publications] 自見 厚郎: "十二指腸一膵相関についてーラット膵管結紮後の膵組織像とCCKの変動について" 臨床と研究. 67. 3167-3171 (1990)
• [Publications] 白見 厚郎: "高脂肪食飼育ラットのセルレイン誘発膵炎の防御効果" 膵臓. 5. 79-88 (1990)
• [Publications] 宮坂 京子: "膵外分泌の調節機構" 代謝. 27. 11-20 (1990)
• [Publications] 船越 顕博: "ラットのセルレイン膵炎に対するCamostateの予防効果" 現代医療. 22. 538-545 (1990)
• [Publications] 宮坂 京子: "ラットにおける2種のCCKーreleasing peptideのCCK放出能と膵外分泌刺激作用の比較" 日本消化器病学会雑誌速報. 88. 1147-1147 (1991)
• [Publications] 宮坂 京子: "実験膵炎からみたプロテア-ゼインヒビタ-経口投与に伴う問題点" 消化器科. 15. 226-234 (1991)
• [Publications] 宮坂 京子: "膵炎治療におけるプロテア-ゼインヒビタ-:経口投与における基礎的問題" 胆と膵. 12. 847-852 (1991)
• [Publications] 宮坂 京子: "Somatostatin" 胆と膵. 12. 247-280 (1991)
• [Publications] 宮坂 京子: "プロテア-ゼインヒビタ-の経口投与における問題点" 医学のあゆみ. 156. 397-400 (1991)
• [Publications] 宮坂 京子: "ヒト膵分泌性トリプシンインヒビタ-のセルセイン膵炎に対する治療効果" 医学のあゆみ. 158. 429-430 (1991)
• [Publications] 鹿戸 福子: "ラットの膵外分泌におよぼす胃液の影響" 胆と膵. 12. 1125-1129 (1991)
• [Publications] Hirotugu Shinozaki: "Bioactivity of synthetic human cholecystokinin(CCK-33)in vitro and in vivo" Gastroenterologia Japonica. 26. 51-55 (1991)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Bile acids in human plasma interfere with cholecystokinin bioassay using dispersed pancreatic acini" Dig Dis Sci. 36. 310-316 (1991)
• [Publications] Wataru Kimura: "Immunohistochemical study of the distribution of pancreastatin in endcrine tumores of the pancreas and normal pancreatic tissue:Analysis of autopsy cases." Pancreas. 6. 688-693 (1991)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Absence of luminal bile increases duodenal content of cholecystokinin in rats." Proc.Soc.Exp.Biol.Med.197. 175-180 (1991)
• [Publications] 篠崎 博嗣: "Urosodeoxycholateの膵外分泌に対する作用(in vivo,in vitroでの検討)" 日本消化器病学会雑誌. 89. 68-74 (1992)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Isolation and bioactivity of putative cholecystokinin-releasing peptide from rat small intestinal mucosa" Gastroenterol Jap. 27. 83-87 (1992)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Stimulatory and Inhibitory effects of bile salts on rat pancreatic secretion." Gastroenterology. 102. 598-604 (1992)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Manifestation of experimental acute pancreatitis in young and old rats" Arch Gerontol Geriatr,.
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Changes in plasma and duodenal cholecystokinin concentrations after pancreatic duct occlusion in rats" Dig.Dis.Sic.
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Inhibitory effect of taurocholate on CCK release and pancreatic secretion produced by two CCK-releasing peptide in conscious rats" Pancreas.
• [Publications] Akihiro Funakoshi: "Stimulatory effects of islet amyloid polypeptide(Amylin)on exocrine pancreas and gastrin release in conscious rats" Regul Pept.
• [Publications] 船越 顕博: "PCR併用CCKmRNAの定量法の検討" 日本消化器病学会雑誌. 89. 558- (1992)
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Regulation of intestinal concentration of cholecystokinin by bile and/or pancreatic juice" Dig Dis Sci,revised version suvmitted.
• [Publications] Kyoko Miyasaka: "Evidence for aging effects on tissues contents of neurohormonal peptides in the rat" submitted to J Gerontology.
• [Publications] Akihiro Funakoshi: "Protective effect of human pancreatic secretory trypsin inhibitor on cerulein induced acute pancreatitis" submitted to Digestion.
• [Publications] Akihiro Funakoshi: "Recent trends of diabetes mellitus in East Asia" Elsevier Science Amsterdam, 291 (1990)
• [Publications] 宮坂 京子: "消化管ホルモン(X)" 医学図書出版, 582 (1990)
• [Publications] 宮坂 京子: "最新内科大系" 中山書店, 438 (1991)