| Research Abstract |
1.赤血球内グルタチオンペルオキシダ-ゼ(GーPx)活性の測定。
溶血赤血球50μlに0.1Mリン酸緩衝液(pH7.0)50μl,10mM NaN_310μl,4mMGSH 50μlを添加し,37℃10分間インキュベ-ト後,5mM H_2O_250μlを加え37℃7.5分間インキュベ-トする。1.2M過塩素酸200μlを加え,フィルタ-濾過後の上清についてGSH濃度を高速液体クロマトグラフィ-で測定する。GーPx(Uk)={log([GSH]_O)/([GSH]_T)=log([GSH]_O)/([GSH]_S)}×(410)/(50)×1/(7.5)(([GSH]_O:t=oのGSHの濃度)/([GSH]_S:サンプル=oのGSHの濃度))
2.脳内GーPx活性の測定。
脳を0.1Mリン酸緩衝液(pH7.0)5倍量で超音波破砕し,この30μlに10mMNaN_3 5μl,4mMGSH10μlを添加し,37℃10分間インキュベ-ト後,5mMH_2O_210μlを加え37℃5分間インキュベ-トする。1.2M過塩素酸100μl,H_2O645μlを加え,フィルタ-濾過後の上清についてGSH濃度をHPLCで測定する。GーPx(Uk)={log([GSH]_O)/([GSH]_T)ーlog([GSH]_O)/([GSH]_S)}×(800)/(20)×1/5
以上,1.,2.によりHPLCを用いてGーPx活性を測定する方法を確立した。
3.シスチアミン,ジメルカプロ-ルのMPTP投与マウスに及ぼす影響。
シスチアミン(CEA,200mg/kg,皮下)あるいはジメルカプロ-ル(DMC,20mg/kg,筋肉内)を投与し,30分後にMPTP(20mg/kg,皮下)を投与すると,MPTP投与に伴う線条体内DA,DOPAC,HVAの減少は抑制され,脳内GSHの減少とGSSG/GSH比の増加は抑制された。これらの結果から,SH基を持つ薬物はパ-キンソニズムを発症させうるMPTPの神経毒性を,脳内グルタチオン代謝の変化を介して抑制することが示された。
4.神経変性疾患の赤血球内GSH・GSSG濃度,GーPx活性の変化。
パ-キンソン病,脊髄小脳変性症における上記三パラメ-タの測定を行っているが,症例数が未だ少なく,一定の傾向はみられていない。
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