1992 Fiscal Year Annual Research Report

移植腎の拒絶反応に動員されるT細胞抗原受容体の解析

Research Project

Project/Area Number	02670718
Research Institution	Kitasato University School of Medicine
Principal Investigator	小幡文弥北里大学, 医学部, 講師 (60129236)
Keywords	腎移植 / 浸潤T細胞 / T細胞レセプター / PCR法 / 拒絶反応
Research Abstract	移植腎の拒絶反応にどのようなT細胞集団が動員されるかを知るため、親子間腎移植の後拒絶反応を受け摘出に至った腎臓を入手し、浸潤T細胞の抗原レセプター(TCR)の解析を行った。摘出腎の約1/10をハサミによる細断後、コラゲナーゼ処理、パーコール比重遠沈法にて浸潤リンパ球を分離した(収量:6x10^5 cells)。抗CD25抗体と磁気ビーズを用いてCD25^+活性化T細胞画分(全浸潤細胞の約2.5%)を分離し、mRNAを調製した。また比較対照として、未分画の全浸潤細胞からもmRNAを分離した。cDNAを合成後、Vβ共通プライマーとCβプライマーによる30サイクルのPCRによりTCRβ鎖cDNAを特異的に増幅した。プラスミドベクターに組み込んでクローニングの後、DC25^+および未分画浸潤細胞画分それぞれについて31個および35個のTCRβ鎖cDNAの塩基配列決定を行った。その結果、CD25^+T画分については、7種のVβ遺伝子ファミリーが検出され、未分画浸潤細胞で検出された12種のVβファミリーに比べて少なかった。Jβについては、CD25^+T、未分画浸潤細胞にそれぞれ8および9種が検出された。またCDR3配列も全く同一のcDNAが、CD25^+T細胞画分にVβ6.9-Jβ1.2で6個、Vβ3.1-Jβ2.1で3個、Vβ3.1-Jβ2.7、Vβ5.6-Jβ2.5、Vβ12b-Jβ2.3で2個ずつ検出され、限られたT細胞クローンから構成されていることがわかった(オリゴクローナリティー)。但しCDR3が同一のcDNAは、未分画浸潤細胞でも見られ、Vβ8.1-Jβ2.1で3個、Vβ3.1-Jβ2.1、Vβ5.2-Jβ1.3、Vβ5.2-Jβ2.7、Vβ7.1-Jβ2.7で2個ずつ検出された。in vitro MLRに動員されるTCRの場合は、30個前後のcDNA解析では、同一のCDR3配列はほとんど検出されないことを考慮すると、浸潤T細胞の場合、未分画画分でも相当程度のオリゴクーナリティーが存在し、CD25^+画分では、それがより顕著であったと言えるだろう。今後例数を積み重ね、一般化してゆくことが重要である。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Obata F.,Ito K,Ito I,and Kashiwagi N: "Linkage between HLA-DRBI and -DRB3 types in the Japanese population analyzed by oligonucleotide genotyping." Human Immunology. 33. 284-288 (1992)
[Publications] Watanabe K, Ito K, Sato K, Xiao X, Masaki Y, Maruyama S, Okubo M,Obata F, Otani F,Kaneko T, and Kashiwagi N: "Fate of long-sruviving allografts in tolerant recipients induced by fractionated lymphoid irradiation donor bone marrow cell-infusion and FK506 after retransplantation in dogs." Transplantation Proceedings. 25. 339-341 (1993)
[Publications] Ito K, Tsunoda M, Watanabe K, Ito K, Kashiwagi N and obata F: "Isolation and sequence analysis of cDNA for the dog T-cell receptor α and β chains." Immunogenetics.
[Publications] Obata F, Tsunoda M, Kaneko T, Ito K, Ito I, Masewicz S, Mickelson EM,Ollier WER, Cella M, and Kashiwagi N: "Human T-cell receptor TCRAV,TCRBV,and TCRAJ sequences newly found in T-cell clones reactive with allogeneic HLA-class II antigens." Immunogenetics.
[Publications] Obata F, Tsunoda M, Ito K, Ito I, Kaneko T, Pawelec G, and Kashiwagi N: "A single universal primer for the T-cell receptor (TCR) variable genesallows enzymatic amplification and direct sequencing of TCRβ cDNA of various T-cell clones." Human Immunology.
[Publications] Okubo H, Ito K, Tanaka S, Watanabe N, Kashiwagi N, and Obata F: "Analysis of the HLA-DR gene frequencies in Japanese cases of juvenile rheumatoid arthritis and rheumatoid arthritis by oligonucleotide DNA typing." Rheumatology International.
[Publications] Obata F and Kashiwagi N: "Sequence analysis of the T-cell receptor utilized for recognition of allogeneic HLA-class II molecules. in HLA 1991 vol I (eds. Tsuji K, Aizawa M, Sasazuki T)" Oxford University Press,Oxford,
[Publications] Obata F: "T-cell recognition of HLA-class II moleucles. HLA 1991 Vol.I (eds. Tsuji K,Aizawa M, Sasazuki T)" Oxford University Press, Oxford,

1992 Fiscal Year Annual Research Report

移植腎の拒絶反応に動員されるT細胞抗原受容体の解析

Principal Investigator

小幡 文弥 北里大学, 医学部, 講師 (60129236)

Research Products

[Publications] Obata F.,Ito K,Ito I,and Kashiwagi N: "Linkage between HLA-DRBI and -DRB3 types in the Japanese population analyzed by oligonucleotide genotyping." Human Immunology. 33. 284-288 (1992)

[Publications] Ito K, Tsunoda M, Watanabe K, Ito K, Kashiwagi N and obata F: "Isolation and sequence analysis of cDNA for the dog T-cell receptor α and β chains." Immunogenetics.

[Publications] Obata F, Tsunoda M, Kaneko T, Ito K, Ito I, Masewicz S, Mickelson EM,Ollier WER, Cella M, and Kashiwagi N: "Human T-cell receptor TCRAV,TCRBV,and TCRAJ sequences newly found in T-cell clones reactive with allogeneic HLA-class II antigens." Immunogenetics.

[Publications] Obata F, Tsunoda M, Ito K, Ito I, Kaneko T, Pawelec G, and Kashiwagi N: "A single universal primer for the T-cell receptor (TCR) variable genesallows enzymatic amplification and direct sequencing of TCRβ cDNA of various T-cell clones." Human Immunology.

[Publications] Okubo H, Ito K, Tanaka S, Watanabe N, Kashiwagi N, and Obata F: "Analysis of the HLA-DR gene frequencies in Japanese cases of juvenile rheumatoid arthritis and rheumatoid arthritis by oligonucleotide DNA typing." Rheumatology International.

[Publications] Obata F and Kashiwagi N: "Sequence analysis of the T-cell receptor utilized for recognition of allogeneic HLA-class II molecules. in HLA 1991 vol I (eds. Tsuji K, Aizawa M, Sasazuki T)" Oxford University Press,Oxford,

[Publications] Obata F: "T-cell recognition of HLA-class II moleucles. HLA 1991 Vol.I (eds. Tsuji K,Aizawa M, Sasazuki T)" Oxford University Press, Oxford,

小幡文弥北里大学, 医学部, 講師 (60129236)