単一割球の凍結保存及び染色体正常性に関する基礎的研究

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670728
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 千石 一雄 旭川医科大学, 医学部, 講師 (30163124)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 玉手 健一 旭川医科大学, 医学部, 助手 (90207233)
• Keywords: 染色体分析 / 割球分離 / 凍結保存

Research Abstract

1、割球分離後の生存性
2細胞、4細胞、8細胞期の割球分離後の親胚に関してEDTA添加Ca^<2+>、Mg^<2+>free培養液中での割球分離操作により70%の生存率が得られた。透明帯除去法の検討では、機械的透明帯除去後の生存率が70%であったのに対し、透明帯drilling法、pronage処理による透明帯除去法後の生存率は30ー35%と低率であり、この原因としては酵素ならびに酸性Tyrode液による直接的卵細胞膜の障害が考えられた。又透明帯除去後の保護膜の検討において透明帯を除去したままの裸胚の発育能は、Agar抱埋、透明帯再封入した胚とin vitro培養系における成績に有意差は認められない結果を得た。
2、単一割球の生存性
分離された単一割球は2細胞、4細胞、8細胞期の全てのstageにおいて現在のところ、その後の分割は認められず現在割球分離法の技術的向上、至摘培養液の選択に関しひき続き検討中である。
3、割球の細胞遺伝学的検討
単一割球を0.04μg/ml濃度のコルヒチン添加whitten Mediumで6ー8時間培養後、gradual fixation method により低率(4.5%)ではあるが染色体核盤の作製に成功した。現在、核盤作製率向上をめざし各種spindle blocker、至摘固定法に関し検討中である。
4、割球の凍結保存
1.5M DMSO+0.25M sucroseを用いた5step dilusion法により割球分離後の親胚の凍結保存後の発育を30%に認めた。しかし、単一割球に関しては凍結前のcontrol群においてもその後の分割に成功していないため、単一割球の凍結は未だ検討しておらず今後の課題である。