1991 Fiscal Year Annual Research Report
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02670747
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
宮本 新吾 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (40209945)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
和気 徳夫 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (50158606)
今村 利朗 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (10221095)
加藤 秀則 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (60214392)
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| Keywords | 癌抑制遺伝子 / 絨毛癌 / 微小核融合 / cDNAライブラリ- / 染色体 |
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| Research Abstract |
絨毛癌抑制遺伝子の存在する染色体を同定するために、PSV2neoにより標識された1ー22番染色体を単一で保有するマウスA9細胞ライブラリ-の中から1,2,6,7,9,11番染色体を含むA9細胞を選び,微小核形成後,ヒト絨毛癌細胞CC1との間で微小核融合を行い、G418耐性クロ-ンを選択した。各クロ-ンについて1)ヌ-ドマウス皮下移植後の腫瘍形成率2)腫瘍増殖速度3)足場非依存性増殖能4)細胞倍加時間5)血清要求性6)細胞飽和密度、を調べたところ、7番染色体単一移入CC1クロ-ンのみが1),2),3),4)の形質を抑制した。しかし、1,2,6,9,11番染色体を単一移入で保有するCC1親細胞との間に差を認めなかったため、7番染色体上に絨毛癌抑制に関わる遺伝子の存在が推測された。
次に、ヒト絨毛癌細胞の造腫瘍性抑制に関わる遺伝子群をクロ-ニングする目的で、正常ヒト7番染色体単一移マウスA9細胞とA9細胞間でmRNAサブトラクションを行い、正常ヒト7番染色体に発現を由来するcDNAライブラリ-の作成をした。このcDNAライブラリ-を絨毛癌細胞CC1に導入し、1)細胞倍加時間の延長したクロ-ンを選択する目的として、Brd U,Hoechst33258を用いる方法、2)足場非依存性増殖能の抑制されたクロ-ンを選択する目的としてコンカナバリンAを用いる方法、以上の2つの方法を用いてスクリ-ニングを繰り返し、増殖特性の抑制されたクロ-ンを選択した。それぞれの方法により選択されたクロ-ンについて、導入された遺伝子を発現ベクタ-の一部をプライマ-としたPCR法により増幅し、現在いくつかの候補となる遺伝子についてクロ-ニングを終了している。
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[Publications] 宮本 新吾,西田 眞,和気 徳夫: "Dr.Sugawaraらのヒト正常1番染色体に局在する細胞老化制御遺伝子について" Oncologia. 24. 129-130 (1991)
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[Publications] 宮本 新吾,佐々木 雅弘,西田 眞,和気 徳夫: "絨毛癌化とその分子機構" Human Cell. 4. 38-43 (1991)
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[Publications] Miyamoto,S.;Makino,N.;Shimokawa,H.;Akazawa,S.;Wake,N.;Nakano,H.: "The characteristics of erythrocyte sodium transport systems in normal pregnancy and pregnancy induced hypertension." J.Hypertension. 42. (1992)
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[Publications] Imamura,T.;Arima,T.;Kato,H.;Miyamoto,S.;Sasazuki,T.;Wake,N: "Chromosomal deletions and Kーras gene mutations in human endometrial carcinomas." Int.J.Cancer. 51. 1-6 (1992)
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[Publications] Sasaki,M.;Oshimura,M.;Wake,N.: "Cell hybrids between human endometrial carcinoma cells and normal fibroblasts recover tumorigenic potential by the loss of chromosome 4." Genes,chromosome and Cancer. (1992)
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[Publications] Miyamoto,S.;Nishida,M.;Sasaki,M.;Oshimura,M.;Kato,H.;Wake,N: "Introduction of a single chromosome 1 into human endometrial carcinoma cells via microcell fusion induces the cytoskeletal changes." Cancer Research. (1992)
