1990 Fiscal Year Annual Research Report
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02670808
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
高木 知道 徳島大学, 歯学部, 教授 (40048278)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉村 好之 徳島大学, 薬学部, 助手 (20035554)
岡本 康生 徳島大学, 歯学部・附属病院, 助手 (50213989)
山下 菊治 徳島大学, 歯学部, 助手 (30182497)
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| Keywords | BMP / 骨形成 / 細胞分化 / トランスフォ-メ-ション / ラット / 石灰化機構 |
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| Research Abstract |
本年度の計画は、骨誘導因子(BMF)の抽出と精製を基本に、それらの中間生成物の骨誘導効果の検定を行うことであった。ウシ大腿骨と脛骨の10kgを粉砕し、脱灰、脱脂して、脱灰骨基質ゼラチン(BMG)を得た。次いでこれを、塩酸グアニジン抽出、限外濾過、透析、遠心分離し、水不溶性画分と水可溶性画分に分けた。この両者を、ヘパリンセファロ-ズクロマト、ゲル濾過クロマトにかけ、各々をWIFとWSFとした。WIFは、さらにハイドロキシアパタイトクロマト、ゲル濾過HPLC、リクロマト、逆相HPLCにかけ最終抽出物を得た。以上の抽出・精製の方法に、多くの改善を加えた。各々のfractionでの生物学的活性の検定は行っているが、特に、BMGの生体内移植は、軟骨や骨の形成機構の実験的解明にきわめて有効な手法であり、今年度は、軟骨形成に先行する無細胞性の石灰化沈着を認めたことから、生体内骨形成の開始機構に全く新しい概念を提起することができた。また、このBMGを用いて、ラット新生仔の培養筋組織から、著しい軟骨形成を得て、この軟骨芽細胞が、筋衛星細胞の分化転換によって生ずることを明らかにした。
一方、ゲル濾過HPLCを行なったWIFのfractionの一部を用い、これの、骨膜下移植から、多量の軟骨・骨形成を得て、WIFに含まれるBMFは、骨膜構成細胞の増殖と分化を著しく促進することが判明した。
BMFによる石灰化の開始機構、そしてBMFの標的細胞の一部が明かとなり、次年度の研究計画に十分な成果が得られた。
なお、補助金によって購入したパワ-サプライ(BioーRad,Model 1000/500)は、電気泳動に、そして、消耗品としての薬品の購入はBMFの抽出・精製に不可欠であった。
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[Publications] 岡本 康生: "骨誘導因子の筋肉内移植における異所性骨形成機序について." 四国歯学会雑誌. 3. 7-22 (1990)
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[Publications] 高木 知道,山下 菊治: "骨をつくる." 四国歯学会雑誌. 3. 203-219 (1990)
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[Publications] Okamoto,Y.,Y.Horisaka,N.Matsumoto,Y.Yoshimura,J.Kawada,K.Yamashita,and T.Takagi: "Muscle Tissue Reactions to Implantation of Bone Matrix Gelatin." Clin.Orthop.262. 242-253 (1991)
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[Publications] Horisaka,Y.,Y.Okamoto,N.Matsumoto,Y.Yoshimura,J.Kawada,K.Yamashita,and T.Takagi: "Ultrastructure of Cartilage Formation from Neonatal Skeletal Muscle in vitro." Arch.Histo.Cyto.54. (1991)
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[Publications] Horisaka,Y.,Y.Okamoto,N.Matsumoto,Y.Yoshimura,J.Kawada,K.Yamashita,and T.Takagi: "Subperiosteal Implantation of Bone Morphogenetic Protein Adsorbed to Hydroxyapatite." Clin.Orthop.(1991)
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[Publications] Yamashita,K.,Y.Horisaka,Y.Okamoto,N.Matsumoto,Y.Yoshimura,J.Kawada,and T.Takagi: "Effect of Bupivacaine on Muscle Tissue and New Bone Formation Induced by Demineralized Bone Matrix Gelatin." Acta Anat.(1991)
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[Publications] Yamashita,K.,Y.Horisaka,Y.Okamoto,Y.Yoshimura,and T.Takagi: "Analysis of Minerals on Initial Calcification Induced by Demineralized Bone Matrix Gelatin." Jap.J.Oral Biol.(1991)
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[Publications] Yamashita,K.,Y.Horisaka,Y.Okamoto,N.Matsumoto,Y.Yoshimura,J.Kawada,and T.Takagi: "Architecture of Implanted Bone Matrix Gelatin Influences Hetero topic Calcification and New Bone Formation" Proc.Soc.Exp.Biol.Med.(1991)
