2002 Fiscal Year Annual Research Report
脂肪細胞における活性酸素の役割と肥満:細胞外SODを中心として
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02J11442
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Research Institution | Kyorin University |
Principal Investigator |
チャイロングドゥア A. 杏林大学, 大学院・医学研究科, 特別研究員(DC2)
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Keywords | アミノ酸トランスポーター / シスチントランスポーター / シスチン尿症 / 細胞膜輸送 / 腎臓 / タンパク質間相互作用 / cDNAクローニング / 腎近位尿細管 |
Research Abstract |
腎近位尿細管のシスチン輸送体は、1回膜貫通型のシスチン輸送活性化因子rBAT (related to b0, + amino acid transporter)と輸送体本体が連結するによって形成される。輸送体本体の分子実体として12回膜貫通型タンパク質BAT1 (b0, + -type amino acid transporter 1)が明らかにされたが、さらに未同定の輸送体がrBATとヘテロ二量体を形成すると想定されている。本研究は、このrBATの第二のパートナーを同定し、そのシスチン尿症との関わりを明らかにすることを目的とする。rBATの第二のパートナーのcDNAクローニングは、以下の2つのアプローチを平行して進行させる。a)シーケンスデータベースを用いた探索。すでに同定されているrBATのパートナーBAT1の塩基配列を用いて、ESTデータベース及びマウスゲノムデータベースを検索し、BAT1と類似の新規配列を探索した。その結果3種の新規配列(A、B、C)を同定し、その全長cDNAをクローニングした。新規配列Aは、塩基性アミノ酸トランスポーターCAT3と最も高い相同性があり、アフリカツメガエル卵母細胞に発現させることにより、アルギニン、オルニチン、リジンを輸送することが明らかになった。新規配列Bは、アミノ酸配列上最もBAT1に近く、卵母細胞への単独発現では輸送活性を示さなかったため、卵母細胞発現系への4F2hcとの共発現実験、HEK293細胞へのrBATとの共発現実験を進行させている。b)rBATとジスルフィド結合を介して連結するタンパク質の同定。rBATとグルタチンS-トランスフェラーゼとの融合タンパク質をコードするcDNAを作製し、既に発現ベクターに組み込んだ。これを強制発現させるトランスジェニックマウスを作製中である。強制発現マウスの腎からタンパク質を精製し、グルタチオンカラムで精製し、同定する。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Uchino, H., Kanai, Y., Kim D.K., Wenpe, M.F., Chairoungdua, A., Morimoto, E., Anders, M.W., Endou, H.: "Transport of amino acid-related compounds mediated by L-type amino acid transorter 1 (LAT1) : Insights into the mechanisms of substrate recognition"Mol. Pharmacol.. 61. 729-737 (2002)
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[Publications] Jung KY, Takeda M, Shimoda M, Narikawa S, Tojo A, Kim DK, Chairoungdua A, Choi BK, Kusuhara H, Sugiyama Y, Sekine T, Endou H.: "Involvement of rat organic anion transporter 3 (rOAT3) in cephaloridine-induced nephrotoxicity : In comparison with rOAT1"Life Sci. 80. 1861-1874 (2002)
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[Publications] Enomoto, A., Kimura, H., Chairoungdua, A., Shigeta, Y., Jutabha, P., Cha, S.H., Hosoyamada, M., Takeda, M., Sekine, T., Igarashi, T., Matsuo, H., Kikuchi, Y., Oda, T., Ichida, K., Hosoya, T., Shimokata, K., Niwa, T., Kanai, Y., Endou, H.: "Molecular identification of a renal urate-anion exchanger that regulates blood urate levels"Nature. 417(6887). 447-452 (2002)
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[Publications] Matsuo, H., Kanai, Y., Kim, J.Y., Chairungdua, A., Kim, D.K., Inatomi, J., Shigeta, Y., Ishimine, H., Chekuntode, S., Tachampa, K., Choi, H.W., Babu.E., Fukuda, J., Endou.H.: "Identification of novel Na^+-independent acidic amino acid transporter with structural similarity to the member of heterodimeric amino acid transporter family associated with unknown heavy chains"J. Biol. Chem.. 277(3). 21017-21026 (2002)