2003 Fiscal Year Annual Research Report
新規シスチン輸送体の同定とシスチン尿症患者の遺伝子解析
Project/Area Number |
02J11442
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Research Institution | Kyorin University |
Principal Investigator |
チャイロングドゥア A 杏林大学, 医学研究科, 特別研究員(PD)
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Keywords | アミノ酸トランスポーター / シスチントランスポーター / シスチン尿症 / 細胞膜輸送 / 腎臓 / タンパク質間相互作用 / cDNAクローニング |
Research Abstract |
腎近位尿細管のシスチン輸送体は、1回膜貫通型のシスチン輸送活性化因子rBAT(related to b0,+amino acid transporter)と輸送体本体が連結するによって形成される。輸送体本体の分子実体として12回膜貫通型タンパク質BAT1(b0,+-type amino acid transporter 1)が明らかにされたが、さらに未同定の輸送体がrBATとヘテロ二量体を形成すると想定されている。本研究は、このrBATの第二のパートナーを同定し、そのシスチン尿症との関わりを明らかにすることを目的として行われた。平成15年度は、rBATの第二のパートナーの同定のために、プロテオミクスのアブローチを採用した。すなわち、rBATとジスルフィド結合を介して連結するタンパク質の探索のために、rBATとグルタチン-S-トランスフェラーゼとの融合タンパク質をコードするcDNAを作製し、発現ベクターに組み込み、マウス胚に注入することによって、これを強制発現するトランスジェニックマウスを作製した。尾ゲノムDNAを用いたPCRにより遺伝子の導入を確認したマウスの腎を用いて、抗グルタチン-S-トランスフェラーゼ抗体によるウエスタンブロットを行ったところ、融合タンパク質が強発現していることが明らかになった。この腎ホモジェネートから膜タンパク質を抽出し、グルタチオンカラムで精製し、還元したのち二次元電気同定を行い、候補スポットを得た。候補スポットをゲル内消化し、マススペクトロメトリーによるタンパク質同定が進行中である。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Babu, E, Kanai, Y, Chairoungdua, A, Kim, DK, Iribe, Y, Tangtrongsup, S, Jutabha, P, Li, Y, Ahmed, N, Sakamoto, S, Anzai, N, Endou, H: "Identification of a novel system L amino acid transporter structurally distinct from heterodimeric amino acid transporters."J.Biol.Chem.. 278. 43838-43845 (2003)
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[Publications] Jutabha, P, Kanai, Y, Hosoyamada, M, Chairoungdua, A, Kim, DK, Iribe, Y, Babu, E, Kim, JY, Anzai, N, Chatsudthipong, V, Endou, H: "Identification of a novel voltage-driven organic anion transporter present at apical membrane of renal proximal tubule."J.Biol.Chem.. 278. 27930-27938 (2003)
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[Publications] Matsuo, H, Kanai, Y, Tokunaga, M, Nakata, T, Chairoungdua, A, Ishimine, H, Tsukada, S, Ooigawa, H, Nawashiro, H, Kobayashi, Y, Fukuda, J, Endou, H: "High affinity D- and L-serine transporter Asc-1 : Cloning and dendritic localization in the rat cerebral and cerebellar cortices."Neurosci.Left.. 358(2). 123-126 (2004)