1992 Fiscal Year Annual Research Report
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03044113
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西村 仁 北海道大学, 薬学部, 助手 (80241347)
中川 和憲 九州大学, 医学部, 助手 (50217668)
牟田 達史 九州大学, 理学部, 助手 (60222337)
川畑 俊一郎 九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
居石 克夫 九州大学, 医学部, 教授 (70108710)
一瀬 白帝 山形大学, 医学部, 教授 (10241689)
藤川 和雄 ワシントン大学, 生化学部, 研究教授
EARL W.Davie ワシントン大学, 生化学部, 教授
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| Keywords | 組織因子 / VII因子 / 外因系血液凝固反応 / Glaドメイン / VIIa因子 / IX因子 / VII-TF分子複合体 / Gla-EGF1 |
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| Research Abstract |
VII/VIIa因子と組織因子(TF)の分子間相互作用を解析するため、TFとVIIa因子の相互作用をリン脂質の非存在下、合成基質を用いて評価した結果、Glaドメインを除去したVIIa因子(VIIa(GD-)因子)ではTFとの親和性が低く、このドメインがVIIa-TF因子間の相互作用に関与することが示唆された。次にVII(a)因子を断片化し、その中からTFと特異的に結合する断片を検策した。得られた断片とTFの親和性をVIIa-TF複合体形成の阻害実験で評価したところ、VIIaのL-鎖(Ki=3.5×10^<-7>)及び、GlaドメインとEGF様第1号ドメインを含む85残基のペプチド(Gla-EGF1ペプチド、Ki=1.0×10^6M)は強い阻害活性を示した。また、これらの断片をα-キモトリプシンで処理し、GlaドメインとEGF様第1ドメインの間で切断すると阻害効果が消失した。従って、Glaドメインの関与するTF結合部位はGla-EGF1ペプチドの構造内に存在することが判明した。
一方、Glaドメインを除去したVIIa因子は高濃度のTF存在下で、その活性が増強されることから、Glaドメインの関与しない相互作用部位の存在が推測された。そこで、VII、VII(GD-)及びVIIa(GD-)因子をdansyl-Glu-Gly-Arg chloromethyl ketoneで処理した後、同様にTFとの親和性を比較したところ、不活性化したVIIa(GD-)因子が強い親和性を示したのに対し、前駆体のVII(GD-)因子は親和性を示さなかった。従って、Glaドメイン非依存性のTF結合部位は活性型VIIa因子に特異的に存在し、TFによるVIIa因子の触媒活性増強に関与すると考えられる。
以上の結果から、VII因子とTFとの分子間相互作用は、VII因子のアミノ端側ドメイン、特にGlaからEGF第1ドメインにかけての領域及びカルボキシ末端側の触媒部位周辺の領域にあって、2点結合により相互作用していることが考えられる。今後さらに詳細な結合様式を高次構造の解析から究明したい。
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[Publications] Higashi,S.,Nishimura,H.,Fujii,S.,Takada,K.,and Iwanaga,S.: "Tissue Factor Potentiates the Factor VIIa-cataluzed Hydrolusis of an Ester Substrate." J.Biol.Chem.267. 17990-17996 (1992)
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[Publications] Nishimura,H.,Takao,T.,Hase,S.,Shimonishi,Y.,and Iwanaga,S.: "Human Fator X Has a Tetrasaccharide O-Glycosidically Linked to Serine-61 through the Fucose Residue." J.Biol.Chem.267. 17520-17525 (1992)
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[Publications] Shigematsu,Y.,Miyata,T.,Higashi,S.,Miki,T.,Sadler,J.E.,and Iwanaga,S.: "Expression of Human Soluble Tissue Factor in Yeast and Enzymatic Properties of Its Complex with Factor VIIa." J.Biol.Chem.267. 21329-21337 (1992)
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[Publications] Takeya,H.,Nishida,S.,Miyata,T.,Kawada,S.,Saisaka,Y.,Morita,T.,and Iwanaga,S.: "Coagulation Factor X Activating Enzyme from Russell′s Viper Venom(RVV-X):A Novel Metalloproteinase with Disintegrin(platelet aggregation inhibitor)-like and C-type Lectin-like Domains." J.Biol.Chem.267. 14109-14117 (1992)
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[Publications] Miyata,T.,Aruga,R.,Umeyama,H.,Bezeaud,A.,Guillin,M-C.,and Iwanaga,S.: "Prothrombin Salakta:Substitution of Glutamic Acid-466 by Alanine-Reduces the Fibrinogen Clotting Activity and the Estarase Activity." Biochemistry. 31. 7457-7462 (1992)
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[Publications] Nishimura,H.,Yamashita,S.,Zeng,Z.,Walz,D.A.,and Iwanaga,S.: "Evidence for the Existence of O-linked Sugar Chains Consisting of Glucose and Xylose in Bovine Thrombospondin." J.Biochem.111. 460-464 (1992)
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[Publications] Iwanaga,S.,Miyata,T.,Tokunaga,F.,and Muta,T.: "Moleculay Mechanism of Hemolymph Clotting System in Limulus" Pergamon Press Ltd,New York, 32 (1992)
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[Publications] Iwanaga,S: "The Limulus Clotting Reaction" Current Biology Ltd,ISSN, 10 (1993)
