1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血幹細胞に発現されている細胞表面機能分子の分子生物学的解析

Research Project

Project/Area Number	03252213
Research Institution	The Institute of Physical and Chemical Research
Principal Investigator	中内啓光理化学研究所, フロンティア研究システム, 研究員 (40175485)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中村幸夫理化学研究所, フロンティア研究システム, 研究員 (60231479) 小糸厚理化学研究所, フロンティア研究システム, 研究員 (70231305)
Keywords	Cーkit / CD34 / エリスロポエチンレセプタ- / 血液幹細胞
Research Abstract	昨年度、CD34抗体とFACSクロ-ンソ-ティングを組み合わせた単細胞培養系を用いて末梢血中の多能性幹細胞の存在を直接的に証明し、報告した。本年度は、もうひとつの血液幹細胞のソ-スとして考えられる臍帯血中のCD34陽性細胞について解析を行った。在胎26週から41週までの臍帯血19例に関して解析したところ、臍帯血中のCD34陽性細胞の比率は0.34%と成人あるいは小児の末梢血より有意に高い値を示した。またコロニ-形成率も平均45.5%と高く、骨髓中のCD34陽性細胞と同程度の値であった。これらのデ-タは、臍帯血中がDC34陽性の多能性幹細胞を骨髄と同レベル含んでいて、血液幹細胞を得るためのソ-スとなりえることを示唆してをり、今後の骨髄バンク、骨髄移植への応用の可能性が期待される。一方、CD34は、前述のように骨髄、末梢血、臍帯血中の血液幹細胞に発現されている分子量105ー120kdの糖蛋白で、その発現は骨髄球系、リンパ球系白蛋病細胞の一部にも認められること、CD34抗体がメチルセルロ-ス上でのコロニ-形成を阻止することなどから、造血系の分化増殖に関して重要な役割を持つ分子であることが想定される。しかしながら、その構造並びに機能に関しては不明の点が多い。そこで我々はこの分子をコ-ドするcDNAのクロ-ニングを目的としてCD34陽性の巨核芽球性白血病細胞株(UT7)よりmRNAを抽出し、発現ベクタ-(pCDM8)を用いてcDNAライブラリ-を作製した。これをCOS細胞にトランスフェクションした後、CD34抗体で染色し、陽性細胞をFACSで回収するという操作を繰り返し、最終的にCD34をコ-ドするcDNAを単離した。単離したcDNAは2463bpで、385アミノ酸をコ-ドするORFを有する膜蛋白で細胞内領域は約70アミノ酸より構成されるが既存のカイネ-スドメインは認められなかった。またcDNAクロ-ンのなかにはalternative splicingによると思われる挿入配列を持つものが有り、その生物学的意義について現在検討中である。

Research Products
(23 results)

All Other

All Publications (23 results)

[Publications] Seiji Okada,et al.: "Effects of Interleukinー3(ILー3),ILー6 and granulocyte colony stimultaing factor on sorted murine splenic progenitor cells." Experimental Hematology. 19. 42-46 (1991)
[Publications] Yoshikazu Sugimoto,et al.: "Thyー1 as a negative growth regulator in vーras transformes mouse fibroblasts." Cancer Research.51. 99-104 (1991)
[Publications] Norio Komatsu,et al.: "Establishment and characterization of a human megakaryoblastic cell line which requires granulocyteーmacrophage colony stimulating factor,interleukin 3 or erythorpoietin for growth." Cancer Research.51. 341-348 (1991)
[Publications] Gunji Yuuji,et al.: "Support of early B cell differentiation in mouse fetal liver by stromal cells and Interleukinー7." Blood.77. 2612-2617 (1991)
[Publications] Minetaro Ogawa,et al: "Expression and function of cーkit in hemopoietic progenitor cells." J Exp.Med.174. 63-71 (1991)
[Publications] Seiji Okada,et al.: "Expression and function of cーkit molecule in hematopoietic stem cells." Blood.78. 1706-1712 (1991)
[Publications] Junーichi Tsunoda,et al.: "In vivo stem cell function of Interleukinー3ーinduced blast cells." Blood.78. 318-322 (1991)
[Publications] Hideo Ema,et al.: "Multipotent and committed CD34+ cells in bone marrow transplantation." Jpn.J.Cancer Res.82. 547-552 (1991)
[Publications] Akira Ohara,et al.: "Generation of B Lymphocytes From a Single Hemopietic Progenitor C'e In Vitro" International Immunology.3. 703-709 (1991)
[Publications] Mayumi Onishi,et al.: "CD4 Dull Positive Hematopoietic Stem Cells in Murine bone marrow." in revision.
[Publications] 岡田誠治,中内啓光.: "血液幹細胞の純化とその応用" 医学のあゆみ. 156. 561-566 (1991)
[Publications] 小糸厚,中内啓光: "ILー4と抗CD40抗体によるB細胞増殖." 血液・腫瘍科. 23. 65-69 (1991)
[Publications] 中内啓光: "遺伝子治療の標的細胞としての血液幹細胞." B10medica. 6. 39-43 (1991)
[Publications] 中村幸夫,中内啓光: "ヒト血液幹細胞の分化" 臨床検査.35. 654-657 (1991)
[Publications] 中村幸夫,中内啓光: "遺伝子のトランスフェクション" 臨床医.17. 1684-1685 (1991)
[Publications] 松崎有未,中内啓光: "血液幹細胞の分化" 遺伝. 45. 7-8 (1991)
[Publications] 松崎有未,中内啓光.: "マウスおよびヒトの血液幹細胞." 細胞.24. 137-142 (1992)
[Publications] 岡田誠治,中内啓光: "多能性幹細胞の単離と培養の可能性." 臨床免疫.
[Publications] Toshio Hattori,et al.: "“Double negative"(CDーCD8ー)TCRab+ Adult T cell Leukemia cells proliferate vigoroulsly in the presence of ILー2 or ILー4."In:“Myelodysplastic Syndrome and Cytokines"" Elsevier Science Publishers., 137-140 (1991)
[Publications] Yasusada Miura,et al.: "“Differentiation pathways of cloneーsorted CD34ーpositive cells."In:“myelodysplastic Syndrome and Cytokines."" Elsevier Science Publishers., 39-48 (1991)
[Publications] Hiromitsu Nakauchi,et al.: "“In Vitro single cell assay for human stem cells using FACS cloneーsorting."In:“Flow cytometry and image analysis for clinical applications."" Elsevier Scinece Publishers., 227-232 (1991)
[Publications] 松崎有未,永吉和成,中内啓光: "ソ-ティングの実際と注意点:フロ-サイトメトリ-マニュアル" 日本フロ-サイトメトリ-学会.,
[Publications] 中内啓光.: "血液幹細胞の純化と増殖因子,免疫'92" 中山書店,

1991 Fiscal Year Annual Research Report

造血幹細胞に発現されている細胞表面機能分子の分子生物学的解析

Principal Investigator

中内 啓光 理化学研究所, フロンティア研究システム, 研究員 (40175485)

Research Products

[Publications] Seiji Okada,et al.: "Effects of Interleukinー3(ILー3),ILー6 and granulocyte colony stimultaing factor on sorted murine splenic progenitor cells." Experimental Hematology. 19. 42-46 (1991)

[Publications] Yoshikazu Sugimoto,et al.: "Thyー1 as a negative growth regulator in vーras transformes mouse fibroblasts." Cancer Research.51. 99-104 (1991)

[Publications] Norio Komatsu,et al.: "Establishment and characterization of a human megakaryoblastic cell line which requires granulocyteーmacrophage colony stimulating factor,interleukin 3 or erythorpoietin for growth." Cancer Research.51. 341-348 (1991)

[Publications] Gunji Yuuji,et al.: "Support of early B cell differentiation in mouse fetal liver by stromal cells and Interleukinー7." Blood.77. 2612-2617 (1991)

[Publications] Minetaro Ogawa,et al: "Expression and function of cーkit in hemopoietic progenitor cells." J Exp.Med.174. 63-71 (1991)

[Publications] Seiji Okada,et al.: "Expression and function of cーkit molecule in hematopoietic stem cells." Blood.78. 1706-1712 (1991)

[Publications] Junーichi Tsunoda,et al.: "In vivo stem cell function of Interleukinー3ーinduced blast cells." Blood.78. 318-322 (1991)

[Publications] Hideo Ema,et al.: "Multipotent and committed CD34+ cells in bone marrow transplantation." Jpn.J.Cancer Res.82. 547-552 (1991)

[Publications] Akira Ohara,et al.: "Generation of B Lymphocytes From a Single Hemopietic Progenitor C'e In Vitro" International Immunology.3. 703-709 (1991)

[Publications] Mayumi Onishi,et al.: "CD4 Dull Positive Hematopoietic Stem Cells in Murine bone marrow." in revision.

[Publications] 岡田 誠治,中内 啓光.: "血液幹細胞の純化とその応用" 医学のあゆみ. 156. 561-566 (1991)

[Publications] 小糸 厚,中内 啓光: "ILー4と抗CD40抗体によるB細胞増殖." 血液・腫瘍科. 23. 65-69 (1991)

[Publications] 中内 啓光: "遺伝子治療の標的細胞としての血液幹細胞." B10medica. 6. 39-43 (1991)

[Publications] 中村 幸夫,中内 啓光: "ヒト血液幹細胞の分化" 臨床検査.35. 654-657 (1991)

[Publications] 中村 幸夫,中内 啓光: "遺伝子のトランスフェクション" 臨床医.17. 1684-1685 (1991)

[Publications] 松崎 有未,中内 啓光: "血液幹細胞の分化" 遺伝. 45. 7-8 (1991)

[Publications] 松崎 有未,中内 啓光.: "マウスおよびヒトの血液幹細胞." 細胞.24. 137-142 (1992)

[Publications] 岡田 誠治,中内 啓光: "多能性幹細胞の単離と培養の可能性." 臨床免疫.

[Publications] Toshio Hattori,et al.: "“Double negative"(CDーCD8ー)TCRab+ Adult T cell Leukemia cells proliferate vigoroulsly in the presence of ILー2 or ILー4."In:“Myelodysplastic Syndrome and Cytokines"" Elsevier Science Publishers., 137-140 (1991)

[Publications] Yasusada Miura,et al.: "“Differentiation pathways of cloneーsorted CD34ーpositive cells."In:“myelodysplastic Syndrome and Cytokines."" Elsevier Science Publishers., 39-48 (1991)

[Publications] Hiromitsu Nakauchi,et al.: "“In Vitro single cell assay for human stem cells using FACS cloneーsorting."In:“Flow cytometry and image analysis for clinical applications."" Elsevier Scinece Publishers., 227-232 (1991)

[Publications] 松崎 有未,永吉 和成,中内 啓光: "ソ-ティングの実際と注意点:フロ-サイトメトリ-マニュアル" 日本フロ-サイトメトリ-学会.,

[Publications] 中内 啓光.: "血液幹細胞の純化と増殖因子,免疫'92" 中山書店,

中内啓光理化学研究所, フロンティア研究システム, 研究員 (40175485)

[Publications] 岡田誠治,中内啓光.: "血液幹細胞の純化とその応用" 医学のあゆみ. 156. 561-566 (1991)

[Publications] 小糸厚,中内啓光: "ILー4と抗CD40抗体によるB細胞増殖." 血液・腫瘍科. 23. 65-69 (1991)

[Publications] 中内啓光: "遺伝子治療の標的細胞としての血液幹細胞." B10medica. 6. 39-43 (1991)

[Publications] 中村幸夫,中内啓光: "ヒト血液幹細胞の分化" 臨床検査.35. 654-657 (1991)

[Publications] 中村幸夫,中内啓光: "遺伝子のトランスフェクション" 臨床医.17. 1684-1685 (1991)

[Publications] 松崎有未,中内啓光: "血液幹細胞の分化" 遺伝. 45. 7-8 (1991)

[Publications] 松崎有未,中内啓光.: "マウスおよびヒトの血液幹細胞." 細胞.24. 137-142 (1992)

[Publications] 岡田誠治,中内啓光: "多能性幹細胞の単離と培養の可能性." 臨床免疫.

[Publications] 松崎有未,永吉和成,中内啓光: "ソ-ティングの実際と注意点:フロ-サイトメトリ-マニュアル" 日本フロ-サイトメトリ-学会.,

[Publications] 中内啓光.: "血液幹細胞の純化と増殖因子,免疫'92" 中山書店,